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初步筛选重组质粒的原理
蓝白
筛选的
实验
原理
答:
1)
初步筛选
载体质粒DNA pBS上带有Ampr 基因而外源片段上不带该基因,故转化受体菌后只有带有pBS DNA的转化子才能在含有Amp的LB平板上存活下来;而只带有自身环化的外源片段的转化子则不能存活。此为初步的抗性筛选。2)蓝白筛选当外源片段插入到pBS
质粒的
多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失...
怎样用营养缺陷型
筛选重组
子和非重组子
答:
转化、筛选、鉴定。
1、将外源DNA片段与载体DNA的连接反应物不经分离直接用于转化,再加上重组率和转化率的不理想
,因此必须通过筛选和鉴定来区分转化子与非转化子。2、在不含目标营养组分的培养基上,只有转化子才能生长。因此,通过观察菌落在特定培养基上的生长情况,就可以初步判断哪些是转化子。3、为...
2010年江苏高考生物第27题 填空(4)
答:
4.防止外源DNA和
质粒
在切割后自身成环 5.DNA连接酶 6.对成功接合目标基因的质粒进行
筛选
(其实认为这道题这里有点小问题,因为一般接合前后不一致才能进行筛选,也就是说,如果质粒含有抗性基因,有效切点应位于抗性基因内部,像smaI切点那样。如此在成功接入外源DNA后抗性基因失活,细菌在有抗生素的培养...
基因克隆的基本步骤有哪些
答:
(1)插入失活法:外源DNA片段插入到位于
筛选
标记基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位点后,会造成标记基因失活,表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变,通过这些可以
初步
鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法(白色菌落是
重组质粒
)。(...
有关标记基因和受体细胞的
筛选的
问题
答:
其次,
标记基因和目的基因(用你举例的四环素)是体外利用基因工程技术重组到一起的
,然后转化入对四环素敏感的受体株才可以进行四环素筛选,能存活的就是阳性,不能得就是质粒没转入 当然了,看是否成功制备除了抗性标记的初步筛选还得进一步酶切电泳测序或者目的基因产物测定 ...
pcdna3.1作为载体的
重组质粒
转入大肠杆菌怎么检测
筛选
答:
pcDNA3.1本身就有抗性,可以用抗性培养基进行
初步筛选
,然后长出来的克隆筛选,一般为三种:1.设计扩增外源基因片段的引物,进行菌液PCR 2.提取
质粒
,做质粒双酶切--Hind Ⅲ和EcoRⅠ(这个最为准确)3.设计引物做测序
质粒
构建的载体在基因工程中如何向下遗传,之后如何DNA检测,不是说提 ...
答:
如何遗传?
重组质粒
,即基因载体。是一个复制子,在细胞内可以自主复制,细胞分裂时,质粒随机分配进入子细胞,类似细胞质的母性遗传(如线粒体、叶绿体等)。如何检测?
质粒的
检测因质粒性质不同而不同,一般人工质粒有抗性基因,可以通过抗性
筛选
而大致判断。最经典的质粒确认是质粒DNA提取(不含有宿主DNA...
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关...
答:
一端是平末端,一端是黏性末端,所以连接后可获得含有1种目的基因的
重组质粒
,切割使氯霉素抗性基因被破坏,新霉素抗性基因保持正确,所以培养基中含有新霉素.(4)根据题意,加X酶后,MspⅠ仍能识别并切割,BamHI和SmaI对类似变化也十分敏感,KpnⅠ则不敏感,所以能酶切的MspⅠ和KpnⅠ,结合质粒中酶...
微生物菌种的
筛选
答:
(3)体外连接与包装 将染色体DNA片段与载体DNA片段用T4 DNA连接酶连接。然后
重组
体DNA与噬菌体包装蛋白在体外进行包装。(4)重组噬菌体感染大肠杆菌 将包装得到的重组噬菌体在大肠杆菌内经增殖并裂解宿主细胞,产生的溶菌产物组成重组噬菌体克隆库,即基因文库。(5)基因文库的鉴定和扩增 对于文库的...
组织特异性启动子的结果与分析
答:
得到大小约为600 bp的DNA片段(图1略),条带单一、整齐、明亮。
重组质粒的
PCR检测及酶切鉴定以
初步筛选
出来的质粒DNA为模板进行PCR扩增及经Sac I/Xho I双酶切后电泳检测,均获得大小约为600 bp的单一明亮条带(图2略),片段大小与预期一致.表明外源DNA片段已经连接到T载体上。
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