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选择探针的基本原则
2020-11-05 Taqman
探针的
设计及荧光基团的
选择
答:
探针设计的基本原则:
1. 保守:探针要绝对的保守
,有时分型就单独依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对,就可能检测不出来。若找不到完全保守的片段,也只能选取有一个碱基不同的片段。且这个不同的碱基最好在探针的中间,对探针与目的片段的杂交影响不大,
不相同的碱基最好不要在两端
,因为两端不利于探针的杂交。
生物学的
探针
是什么概念?
答:
探针的选择应基于以下原则:
具备高特异性、易于制备和标记
,以及稳定的杂交性能。
试述
探针的
设计
原则
。
答:
(1)针对同一待测靶基因的表达可设计若干探针序列,这些探针序列互相之间尽可能有最小覆盖,或者不覆盖
(2)应避免选择细胞中含量丰富的rRNA、tRNA的互补序列或相近序列作为探针(3)探针长度一般为16bp~25bp,(G+C)%应在40%~60%以内,以减少非特异性杂交(4)探针分子中避免互补的序列的存在,也要控制...
高中生物学中
探针的
作用
答:
制备DNA指纹图时选择探针与选择限制酶同样重要,
探针选择的基本原则是:探针必须具备高度特异性,探针制备与标记容易,以及探针的杂交必须稳定等因素
。
如何设计荧光定量PCR的引物及TaqMan
探针
答:
通用原则 1,
先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针
。2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的最好能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性 3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致...
定量PCR Taqman
探针
设计与体系优化
答:
第二步:如果其它条件一致,那么这个第二步——引物探针的设计就可以说是定量PCR成败的关键了,通过各方面经验的总结有以下几个基本的原则:
先选择好探针
,然后设计引物使其尽可能的靠近探针。 所选序列应该高度特异,尽量选择具有最小二级结构的扩增片段——这是因为二级结构会影响反应效率,而且还会阻碍酶的扩增。建议先...
探针
设计与引物设计的区别是什么呢?
答:
2、探针设计原则:(1)靶基因的确定:选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。(2)检测片段的确定:选择检测组内的
保守
(突变少)(避免假阴性)、组间特异的序列(突变多)(避免假阳性)作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。(3)引物:长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(...
分子杂交的DNA分子杂交
探针
分类
答:
按上述
原则选
出的
探针
会增加成功的机会,选定后进行合成与标记,并摸索合适的杂交条件。方法是制备几张点有特异靶DNA和不相关DNA的膜,各膜分别在不同温度下与探针杂交,特异靶DNA杂交信号强而非特异DNA不产生任何杂交反应的就是最适杂交温度。在进行点突变检测杂交的反应时,洗膜条件和温度物
选择
往往更为重要。所选...
如何设计sybrgreen法荧光定量pcr引物
答:
通用
原则
1 先
选择探针
设计引物使其尽能靠近于探针 2 扩增度应超400bp理想能100-150bp内扩增片断约短效扩增反应越容易获较短扩增片断容易保证析致性 3 保持GC含量20%80%间GC富含区容易产非特异反应导致扩增效率降低及SG析非特异信号 4 保证效率重复性应避免重复核苷酸序列尤其G(能4连续G)5 引物...
从香港出发去国外登机需要核酸报告吗?
答:
选择探针
最
基本的原则
是要有高度特异性,其次也需考虑到制备
探针的
难易性和检测手段的灵敏性等其他因素。1.3 常用核酸分子杂交技术: ① Southern印迹杂交;② Northern印迹杂交;③斑点杂交(dot blotting);④原位杂交(in-situ hybridization);⑤夹心杂交(三明治杂交);⑥液相杂交。恒温扩增 恒温扩增...
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