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western blot方法
westernblot
的原理及操作步骤,应用有哪些
答:
Western Blot与Southern印迹杂交或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳
,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物...
WesternBlot
基本原理及步骤
答:
Western blot即蛋白质印迹法(免疫印迹试验)
,它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性...
western
-
blot
实验步骤
答:
(1)参考一抗的说明书,按照适当比例用Western一抗稀释液稀释一抗
。(2)用微型台式真空泵吸尽封闭液,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。如果一抗孵育一小时效果 不佳,可以在4℃缓慢摇动孵育过夜。(3)回收一抗。加入Western洗涤液,在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10...
生物科研实战——
Western
blot
答:
(3)将膜置于TBST中清洗,置于汉恒生物丽春红染液中,置于摇床摇动3—5分钟
。(4)摇动结束后,用蒸馏水重复漂洗2—3次直至出现清晰条带,如条带清晰整齐则表明之前Western Blot 步骤成功 (5)置于TBST中重复清洗2—3次直至染液褪去 8.封闭 (1)将PVDF膜取出放入预先配制好的脱脂牛奶(3%—5%)...
westen
blot
原理
答:
Western
Blot即蛋白质印迹法(免疫印迹试验)
,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。它是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病...
western
blot
如何定量测定细胞中某蛋白表达量?
答:
Western blot(
蛋白质印迹法
)通常用于定性分析蛋白质的存在以及研究它们在不同条件下的表达变化。其大致步骤如下:1.样品制备:使用合适的裂解缓冲液将细胞裂解,并使用蛋白质浓度测定方法(例如BCA或Bradford法)测定蛋白质总浓度。2.SDS-PAGE:根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶,并加载相同量的总蛋白至各...
western
blot
是干什么的
答:
Western
Blot
显色的
方法
主要有以下几种:i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色 值得一提的是,
western
blot
这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来类似的出现了两个过程...
Western
blot
实验最常见的10个问题及解决方案
答:
Westernblot
显色的
方法
主要有以下几种:(1)放射自显影,(2)底物化学发光ECL,(3)底物荧光ECF,(4)底物DAB呈色。现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。大部分Westernblot显色底物是化学发光底物,发表文章通常也是用底物化学发光ECL 2、目的蛋白信号弱或无 在Westernblot发光检测中常见的问题...
western
blot
内参 actin 是43还是45 kda
答:
在
Western
Blot
实验过程中使用的内参的
方法
有:超级简便的标记内参使用法:只要在二抗孵育时加入HRP标记内参抗体(一抗孵育时不加抗体,即HRP直接标记于内参一抗上),按照正常操作即可。普通内参:当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量相差不大时,可以先进行目的蛋白的抗体温育显色和检测。然后...
Western
Blot
原理技术
答:
其基本流程如下:前面·我们已经介绍过SDS-PAGE,电泳完成后如果要进行
western
blot
则需要转膜 转膜:转膜有湿转和半干转两种不同
方法
。我用的是半干转移法,膜覆盖住胶,膜用balance buffer润湿(甲醇溶液),盖子分别用top buffer和bottom buffer润湿后盖住,转膜10min。注意:1:膜大小合适,防止浪费.2...
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