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荧光素酶检测原理
荧光素酶
和细菌反应时间
答:
荧光素酶和细菌反应时间在15秒内。
荧光素酶检测
是一种自然发光反应,通过荧光素酶与ATP进行反应,可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣,在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量,并以数字形式予以表示,在1975年首先被应用到食品工业中,在1985年在化妆品制造业中得到应用。
哪位同学可以介绍下Luciferase
原理
答:
当底物过量时,发光量的总值与样品的
荧光酶
活性成正比,因此,可对
荧光素酶
报告基因的转录进行间接估计。荧光素酶易被蛋白酶降解,在转染的哺乳动物细胞中的半衰期约为3 小时。荧光素酶报告系统为启动子活性的
检测
提供了一个敏感、快速、非放射性的检测方法。荧光素酶报告基因检测试剂盒(Luciferase Reporter...
“应知应会”双
荧光素酶
报告系统
原理
与实验操作
答:
双
荧光素酶
报告系统
原理
与操作详解 双荧光素酶系统,利用萤火虫和海肾两种荧光素酶的独特特性,作为遗传报告基因,广泛应用于基因表达调控研究。其核心是两个酶的协同作用,萤火虫酶(Firefly luciferase)和海肾酶(Renilla luciferase)在特定条件下分别发光,提供实验数据的标准化和准确性。萤火虫酶,无需后...
荧光素酶
(Luciferase)标记细胞株应用技术
答:
通过活体成像,科学家可以直观地追踪肿瘤的生长、转移和基因表达变化,这种方法非侵入且成本效益高。
荧光素酶
是一种生物发光标记,它在细胞内与底物结合,无需激发光,产生发光现象,光强度与标记细胞数量成正比。在体内成像中,利用红光波段的穿透性,通过高灵敏度CCD镜头和暗箱,能够定量
检测
到细胞发光,...
【实用干货】双
荧光素酶
报告基因
检测
答:
这种方法旨在通过比较两个基因的表达变化,精确评估调控因素对基因表达的影响,如miRNA对靶基因的调控。双
荧光素酶
报告基因
检测
的
原理
是将目的基因的调控序列与荧光素酶基因融合,构建出质粒,转染到细胞中,通过荧光强度差异来反映miRNA调控效果。常用的载体如pRL-TK(海肾荧光素酶)和pGL3-Basic(荧火虫...
肿瘤机制研究利器 |
荧光素酶
报告系统
答:
第二步:验证稳转细胞系。作者同时插入了Luc和GFP,因此下面同时用了流式检测GFP阳性率和用
荧光素酶检测
试剂盒检测了Luc的表达水平。作者挑取了3个克隆,从流式和Luc检测结果来看,#12克隆最好。第三步:建立体内肿瘤模型。作者进行了皮下接种和静脉注射稳转的肿瘤细胞系,并分别在接种后第7天和第10天...
双
荧光素酶
实验
原理
及结果解读演示
答:
双荧光素酶实验
原理
,通过荧光素酶与底物结合的化学发光反应,
检测
特定基因转录的调控元件。构建报告质粒,将目的基因置于萤火虫荧光素酶基因上游,转染细胞,处理后裂解,
测定荧光素酶
活性,评估不同条件对基因活性的影响。同时引入海肾荧光素酶作为内对照,确保实验结果准确性。实验步骤包括构建报告基因质粒,...
干货| 基因功能研究之双
荧光素酶
报告分析
答:
其核心
原理
是通过萤火虫和海肾
荧光素酶
的协同作用,其中萤火虫酶以其特有的黄绿色荧光表现出优异的实验研究性能,而海肾酶则作为内参,不依赖ATP,贡献出稳定的蓝色荧光。理想的报告基因需具备明确的序列标识、灵敏的反应响应和最小的干扰,以确保实验结果的准确性。在具体应用中,例如在转录因子*和microRNA...
看完这篇文章,我不信您还搞不定「双
荧光素酶
报告实验」
答:
例如,通过比较Firefly和Renilla
荧光素酶
的比值来评估启动子活性或miRNA的调控效应。实验中,务必注意对照组的设置和数据处理,如启动子活性
检测
时,将Firefly/Renilla的比值作为luciferase表达的相对值,以排除操作误差。常见的问题及解决方法也涵盖了解决荧光过高或过低的策略,以及如何确保实验结果的客观性。
荧光素酶
报告基因技术流程
答:
接下来,选择合适的细胞,如293细胞(或其他目的细胞),将其接种到24孔板中,让细胞在适宜条件下生长10到24小时,直到达到80%的汇合度。在实验的关键步骤,将报告基因质粒与转录因子表达质粒共同转染到细胞中,启动基因表达过程。随后,从细胞中提取出蛋白质,利用这些蛋白质进行
荧光素酶
的活性
检测
。为了...
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