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选择标记基因和报告基因
绿色荧光蛋白的蛋白应用
答:
作为一种新型的
报告基因
,GFP已在生物学的许多研究领域得到应用。利用绿色荧光蛋白独特的发光机制,可将GFP作为蛋白质标签(protein tagging),即利用DNA重组技术,将目的
基因与
GFP基因构成融合基因,转染合适的细胞进行表达,然后借助荧光显微镜便可对
标记
的蛋白质进行细胞内活体观察。由于GFP相对较小,只有238个氨基酸,将其与...
测定CTL效应的方法有哪些
答:
3.
报告基因
转染法 应用基因转染技术将原核或真核生物的报告酶如β-半孔糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)或荧光素酶(luciferase,luc)基因转染靶细胞,建立稳定转染靶细胞系,以此测定CTL、NK细胞及药物介导的细胞毒和细胞凋亡(Apoptosis)。通过测定释放入培养液中报告酶活性(代表靶细胞死亡数目),可以...
正电子发射计算机断层扫描的显像方法
答:
间接显像间接显像是基于特异性 PET 报告探针与相应靶分子报告基因产物作用而间接对感兴趣目标报告基因表达进行显像,因涉及多种因素,较为复杂。报告基因表达 PET 显像是目前最常用的一种间接显像方法,必须具备报告
基因和报告
探针两因素,且报告探针
与报告基因
表达产物间应具有特异性相互作用。报告基因表达 ...
转录因子实验研究方法有哪些?
答:
1.把感兴趣的TFBS序列(Bait)插入报告基因上游,并将带有TFBS
与报告基因
的质粒整合到酵母基因组中,构建含有报告基因的酵母; 2.提取mRNA构建转录因子cDNA文库,并将文库与酵母激活因子融合相连,构建“Prey”文库。把带有文库的质粒转入到步骤1的酵母中。 3.条件筛选生长酵母,如果TF与TFBS有结合,即报告基因可以顺利表达。
基因
工程 运载体
答:
一方面需要用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;另一方面利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。作为运载体必须具有三个条件:①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制;②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个;③有一定的
标记基因
,便于进行筛选。一般来说,天然...
蛋白相互作用研究方法有哪些?
答:
这种相互作用可以使得 AD 和 BD 结构域也在空间上相互接近,这样就可以激活
报告基因
lacZ 的表达,使得人们可以检测到,如图 1 所示 。这个方法的优势在于廉价且易操作,这个方法一度非常流行,既可以用于筛选目标基因的相互作用蛋白,也可以用于验证相互作用,以及定量检测相互作用的强度。但是缺点在于受试蛋白都需要和 AD...
一个萤火虫荧光素酶
基因
竟然有这么多种用法
答:
首先,pGL3 promoter带有SV40启动子,可用于验证启动子活性和转录因子结合位点。通过构建预测的启动子序列到载体上游,结合萤火虫荧光素酶
报告基因
的表达变化,评估转录活性和转录因子的影响。同时,通过突变分析,确定转录因子的激活或抑制作用及结合位点。microRNA调控通常通过结合编码基因3'UTR实现。利用...
正电子发射计算机断层扫描的PET应用
答:
基因表达 PET 显像主要包括反义 PET 显像(直接显像)
和报告基因
表达 PET 显像(间接显像)两种方法 [3, 7, 15, 16]。利用正电子核素
标记
某一特定序列的反义寡脱氧核苷酸(RASON)作为 PET 显像剂,经体内核酸杂交与相应的靶 mRNA结合,通过 PET 显像,显示基因异常表达组织,反映目标 DNA 转录情况 。反...
染色体有什么用啊?
答:
染色体及染色体相关疾病\x0d\x0a如果将人类
基因
组比作一本厚重的书,这本书则由23章组成,而每章都有它自己的故事。到目前为止,已经完成基因测序的常染色体还包括5、6、7、9、10、13、14、16、19、20、21、22染色体。染色体疾病的特点是大段的基因缺损或重复而使患者的智力和外观发育甚至身体多个...
A549细胞转染问题
答:
按照我的了解siRNA的转染是不带荧光
标记
的,你应该转是质粒DNA吧,请先确定一下;如果您转的是sirna,但是发现没有转进去,请先观察一下你的细胞情况,很有可能是因为细胞引起的转不成功,一般不介意您直接换转染试剂;转染问题还不可以解决的话可以留言给我。
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