从转录组测序结果中得到一基因预测的CDS，pcr后测序获得orf的后半段，怎么得到前半段？

Question

转录组测序给的貌似是完整的orf，全长1600bp左右，在该orf的两端设计引物pcr，产物直接拿去测序，结果orf的后半段1100bp左右序列与转录组测序结果一致，但前半段ATG后面400bp左右的序列不对，下面该怎么做才能得到完整的orf呢？我是新手，希望耐心指教

Answer 1

你先设计一段前半段的引物看看到底有没有正确的那部分序列吧。。本回答被提问者采纳

Answer 2

不一定仅有一个内含子的，可以找到基因组序列参考一下。