双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的。其理论基础是微分吸收和等吸收波长。在单位时间内,两个不同波长的单色光以一定的频率交替照射同一吸收罐的溶液,然后通过探测器和电控系统,计算出这两个波长下的吸光度△a的差值,与被测物质的浓度成正比。
它与传统分光光度法的区别在于,它同时使用两种不同的波长,即测量波长(也称为一次波长λP,一次波长)和参考波长(也称为二次波长λs,二次波长)来测定样品溶液。为了克服单波长测量的缺点,提高测量结果的精度和准确性。
在早期的双波长分光光度计中,两束不同波长的单色光束经过斩波器(双波长分光光度计中用来使光束按一定周期反射、阻挡或通过的装置)处理,然后在一定的时间间隔内交替照射反应杯。待测溶液吸收后,将比色皿照亮,产生两种不同的吸光度。通过减去这两种吸光度得到不同的吸光度ΔA。
扩展资料:
影响双波长法准确度的因素有:
1、化学干扰引起的误差远小于单波长法。
2、利用较小的双波长差可以减小物理干扰引起的误差,且误差本身小于单波长法。
3、由于仪器的非理想性,如反应杯的性质和位置、信号失调、狭缝过大、杂散光等引起的误差较大,特别是后者,对仪器的波长精度要求较高,应尽量减少杂散光。
参考资料来源:百度百科-双波长分光光度法