第2个回答 2019-10-22
盐析:当盐浓度增高到一定值时,蛋白质的溶解度逐渐下降,直至蛋白质析出。
1)
盐的选择
蛋白质沉淀时,常用(NH4)2SO4
优点:溶解度大,且对温度不敏感;分级效果好;有稳定蛋白质结构的作用;价廉,废液可作肥料。
缺点:沉淀后样品需脱盐。
2)
(NH4)2SO4盐析
固体法:搅拌下,少量多次加入
饱和溶液法:在蛋白质溶液中加入预先调好pH的(NH4)2SO4溶液。
透析法:将盛蛋白质溶液的透析袋放入一定浓度的(NH4)2SO4溶液中,通过透析作用改变蛋白质溶液中的盐浓度。使用于小体积样品。
影响盐析的因素:
A、盐析常数Ks的影响:
Cohn方程式:lgS=β-Ks×M
Ks:盐析常数,与T、pH有关,与蛋白质及盐的种类有关
Ks越大--△S变化大--盐析效果好
B、pH的影响
C、蛋白质纯度和浓度的影响
D、其他因素的影响:
金属离子:加EDTA-Na2溶液
脱盐:
透析方法:
搅拌下,3hr平衡,样品液:透析液=1:10;
或静止,过夜,样品液:透析液=1:20。
检查:脱(NH4)2SO4
:用10%BaCl2检查
脱NaCl
:用10%AgNO3检查