第1个回答 2024-08-11
双荧光素酶报告（Dual-Luciferase Reporter）实验是一种常用的遗传调控元件研究手段，通过构建包含荧光素酶基因的报告质粒，如将感兴趣的基因调控元件插入萤火虫荧光素酶（firefly luciferase）上游，以及加入海肾荧光素酶（Rinilla luciferase）作为对照，来评估基因表达变化。这项技术起源于1990年，经过30年的发展，双荧光素酶系统提供了更严谨的实验设计，能够排除细胞生长差异等干扰，保证结果可靠性。
荧光素酶报告基因实验的核心是利用两种酶的特性：萤火虫荧光素酶需要荧光素、氧气、ATP和镁离子，产生黄绿色光；而海肾荧光素酶仅需腔肠素和氧气，发出蓝光。实验中，调控元件通过荧光素酶活性的比值来反映调控效果。例如，通过克隆靶基因的调控元件在Firefly luciferase上游，可以研究启动子的活性和转录因子的影响。
进行实验时，首先构建载体并转化烟草叶片，然后接种农杆菌，将报告质粒和对照质粒注射到叶片中，等待一定时间后取样。实验步骤包括菌液制备、叶片接种、裂解叶片并检测荧光素酶活性。双荧光素酶报告系统的特点包括高灵敏度、低内源性表达等，广泛应用于启动子检测、转录因子相互作用等研究领域。