考马斯亮蓝比色检测牛奶类乳状液食品中蛋白质的含量应该如如何进行前处理去除干扰

如题所述

第1个回答 2013-04-25

考马斯亮蓝法是最常用的生化试剂测蛋白含量的方法里比较不受干扰的一种。但是，有少数的化学药品（尤其是一些去污剂和两性电解质），其空白试剂或与蛋白染料反应后它们的吸光度可能会有显著改变，如SDS、EDTA、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸盐、（NH4）2SO4等，这些物质可以用凝胶过滤，透析，或磷酸钙沉淀蛋白质的方法从样品溶液中除去。这种方法在检测不同种类的个别蛋白质时在灵敏度上会有差异。通常我们可以通过增加染料的浓度或增加溶液的pH
值的方法来减小这一差异。

第2个回答 2013-04-22

离心，或者萃取，除去一些脂类物质。
还有一种方法，是用盐析法把蛋白沉淀出来，再溶解后测定。

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考马斯亮蓝测定蛋白质含量时应注意什么?答：在试剂加入后的5-20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。测定中蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白...

考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量时,如何避免测定中出现误差,避免样品...答：考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较常用的方法，误差可尽量减到最小，需注意：测定OD值前，将分光光度计提前预热至少30分钟，可保证准确性；配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用；盐离子不会影响实验结果，但去污剂，如TRITON X-100，SDS等，会严重干扰实验结果。

bradford法测定蛋白质含量的原理是什么?应如何克服不利因素对测定的影响...答：蛋白与考马斯亮蓝在2min左右达到平衡，反应非常迅速。粘结剂在室温下保持稳定1h。该方法制备的试剂简单，操作方便，反应灵敏度高。灵敏度比Lowry法高4倍，可测定微克水平的蛋白质含量。主要的不利因素是特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰剂。

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