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如何筛选重组质粒
基因工程中常用-互补来
筛选重组质粒
,请说明其原理。
答:
【答案】:很多载体都携带一段细菌的lacZ基因,它编码β-半乳糖苷酶N-端的146个氨基酸,称为α-肽,载体转化的宿主细胞为lacZ△15基因型,它表达β-半乳糖苷酶的C-端肽链,当载体与宿主细胞同时表达两个片段时,宿主细胞才有β-半乳糖苷酶活性,使特异的底物X-gal变为蓝色化合物,这就是所谓的α...
重组质粒
的连接、转化及
筛选
答:
在筛选过程中,
利用遗传学手段如α互补现象进行鉴别
。
重组子的筛选采用Amp抗性筛选与α互补现象筛选相结合的方法
。由于载体pBS带有Ampr基因,只有带有pBS DNA的转化子才能在含有Amp的LB平板上存活。仅带有自身环化外源片段的转化子则无法存活,这是初步的抗性筛选。pBS还带有lacZ基因的调控序列及β半乳糖苷酶...
如何
用插入失活
筛选重组质粒
?
答:
最常见的是蓝白筛选法
。质粒带有抗青霉素的基因。另外还有beta-gal的基因。外源基因的插入点都在beta-gal这个基因的中间。如果外源基因插入成功,那beta-gal就不能正常表达。这个基因的产物是一种酶,可以使培养基中的底物转化为蓝色产物。培养基同时含有青霉素。把质粒插入外源基因后,转染大肠杆菌。这时会...
质粒
的
筛选
标记有哪些用途?
答:
筛选标记主要用来区别重组质粒与非重组质粒,
当一个外源DNA片段插入到一个质粒载体上时,可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒,即重组质粒
。(1)α-互补:是根据载体的遗传特征筛选重组子,使用的载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(emphasis:role=italiclacZemphasis)的...
标记基因
怎么
能
筛选
出
重组质粒
?插入目的基因后的质粒能表达抗性吗?没插...
答:
重组质粒上面除了目的基因,还有抗性基因,放入选择培养基里就可以筛选出抗性质粒,表明重组成功
,但是没有插入目的基因的质粒也可以有抗性
必须用选择培养基
筛选
含
重组质粒
的受体细胞
答:
这个选项未免说得有些牵强。筛选含重组质粒的受体细胞一般用选择培养基,但培养基类型多种,有基本培养基、鉴别培养基、选择培养基、加富培养基,所以还可以用加富培养基来
筛选重组质粒
的受体细胞
只有一个标记基因,
如何筛选重组质粒
答:
1.不能切断标记基因 2.要用两种不同的限制酶切割目的基因和
重组质粒
以防止其自连
怎样筛选
含
重组质粒
的大肠杆菌
答:
以最简单的pUC18
质粒
来说,其上包含了两个编码序列和一个功能序列。两个编码序列分别为编码β半乳糖甘酶α片段基因(LacZα)和氨苄青霉素抗性基因(AmpR)。前者赋予pUC18载体能够通过蓝白斑
筛选重组
子的功能,而后者赋予细菌抗性来筛选转化子的功能。功能序列则为复制起始序列。野生型的质粒功能类似,大多...
dna
重组
子的
筛选
鉴定有哪些步骤
答:
DNA
重组
技术步骤如下:一、
质粒
DNA 提取的pQE-31和pUC18-CAT 质粒。二、制备重组DNA 在灭菌的1.5mL 离心管中,加入pQE-31质粒10mL(2mg/mL),2mL酶切缓冲液,1mL BamHI 和HindIII酶 的混合液(各含10个单位),无菌双蒸水7mL,至反应混合物总体积为20mL,离心混匀,37℃反应过夜。2. 在另一...
怎么
利用选择培养基鉴别是
质粒质粒
答:
选择 (2)A、B、C (2分)(3)限制性核酸内切酶 能识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列,并能切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键 DNA连接酶(4)便于
筛选
已导入
重组质粒
的受体大肠杆菌(5)氨苄青霉素(6)①如果长出蓝色菌落,说明运载体pUC118质粒已转入受体菌,但目的基因没有接入运...
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