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常用的核酸探针标记物
常用的核酸
分子标志物有哪些?
答:
放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物
。放射性核素的灵敏度极高,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量。常用标记核酸探针的核素有
32P、3H、35S
,在Southern印迹杂交中以“P最常用。还应根据标记方法的不同选择相应标记方位的核素,一般情况下,大...
常见
于
标记核酸探针
的放射性核素有?
答:
放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物.放射性核素的灵敏度极高
,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量.常用标记核酸探针的核素有
32P、3H、35S
,在Southern印迹杂交中以“P最常用.还应根据标记方法的不同选择相应标记方位的核素,一般情况下,大多数标记...
核酸探针
的种类
答:
放射性标记探针用放射性同位素做为标记物
。放射性同位素是最早使用,也是目前应用最广泛的探针标记物。常用的同位素有
32P、3H、35S
。其中,以32P应用最普遍。放射性标记的优点是灵敏度高,可以检测到Pg级;缺点是易造成放射性污染,同位素半衰期短、不稳定、成本高等。因此,放射性标记的探针不能实现商品化。
原位杂交组织化学技术的二、
核酸探针
的应用
答:
非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种
。2.按核酸不同性质,探针又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。cDNA探针又可分为双链cDNA探针和单链cDNA探针。 根据不同的杂交实验要求,应选择不同的核酸探针。在大多数情况下,可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在...
普通DNA Marker能被生物素/DIG
标记
吗?
答:
答案普通DNA Marker可以被生物素或DIG标记
,但需要使用相应的化学试剂盒进行标记。其中,生物素和DIG均是常用于核酸检测的标记物质。解释例如,对于生物素标记,可使用生物素-蛋白A(Biotin-Protein A)复合物或生物素-11-UTP等试剂盒进行DNA标记;对于DIG标记,则可使用DIG-11-dUTP或DIG-11-dUTP+DNA ...
DNA
探针
简介
答:
包括cDNA探针)的主要优点有下面三点:①这类探针多克隆在质粒载体中,可以无限繁殖,取之不尽,制备方法简便。②DNA探针不易降解(相对
RNA
而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA
探针的标记
方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移,随机引物法,PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。
分子杂交的方法
答:
核酸探针标记
:核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性
标记物
的与否,可分为放射性
标记探针
和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。分子生物研究中,最
常用的
探针即为双链DNA探针,它广泛应用于...
核酸探针的标记
答:
l)
标记物
溶液,加入无菌双蒸水至终体积为46.5?l,混匀,加入0.5?l稀释的DNaseI溶液,混匀;加入1?l(约5单位)E.coli DNA polymerase I,混匀。⑶置14-16℃反应1-2小时。 可将生物素、地高辛连接在dNTP上,然后象放射性标记一样用酶促聚合法掺入到
核酸
链中制备
标记探针
。也可让生物素、...
有几种
核酸标记
的方法
答:
通过
核酸标记
技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法:1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA
探针
,检测经Northern blot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。3.细胞因子mRNA经反转录为...
分子杂交技术
的核酸探针标记
法
答:
核酸探针
根据核酸的性质,可分为DNA和
RNA探针
;根据是否使用放射性
标记物
的与否,可分为放射性
标记探针
和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中,最
常用的
探针即为双链DNA探针,它广...
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