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核酸探针的种类及其标记方法
探针有哪些类型
?
探针标记有哪些方法
答:
探针有DNA探针和寡核苷酸探针。
探针标记方法有:随机引物标记、切口平移法、末端标记法
。切口平移是切口产生3'羟基和5'磷酸基团,DNA延伸合成3'端,5'端被小片段降解,缺口位点沿着双链向3'端移动,是在体外向DNA分子引入放射性标记核苷酸的技术。随机引物合成是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的...
分子杂交技术核酸探针标记法
答:
核酸探针类型多样,
包括DNA和RNA探针,以及放射性标记和非放射性标记,单链与双链,均匀标记和末端标记
。其中,双链DNA探针在基因鉴定和临床诊断中应用广泛。双链DNA探针标记方法主要有切口平移法和随机引物合成法。切口平移法通过E.coli DNA聚合酶将放射性核苷酸掺入DNA链,产物比活性受多种因素影响,如...
核酸探针标记
答:
在核酸探针标记技术中,
常用的标记方法有两种:放射性同位素标记和非放射性标记
。放射性标记法通常使用32P等放射性同位素,通过大肠杆菌DNA聚合酶I(E.coli DNA polymerase I)的酶促活性,将标记的dNTP掺入新合成的DNA链,形成均匀标记的探针。具体步骤包括:取DNA溶解、加入缓冲液、标记物、酶和DNA聚合...
核酸探针种类
答:
探针的标记方式主要分为放射性标记和非放射性标记
。放射性标记探针,如32P、3H、35S,灵敏度高但存在放射性污染和成本高的问题。而非放射性标记如生物素和地高辛,其中生物素与亲和素形成稳定复合物,通过显色物质检测;地高辛标记的探针具有与放射性标记相当的灵敏度和更高的特异性,逐渐成为研究热点。
核酸探针的种类
答:
可将核酸探针分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类
。作为诊断试剂,较常使用的是基因组DNA探针和cDNA探针。其中,前者应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的DNA后将其克隆到质粒或噬菌体载体中,随着质粒的复制或噬菌体的增殖而获得...
分子杂交技术的
核酸探针标记法
答:
核酸探针
根据核酸的性质,可分为DNA和
RNA探针
;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性
标记探针
和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种
类型的
探针
及标记方法
。 分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广...
核酸探针的标记
答:
切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将
标记
的dNTP掺入到新形成的DNA链中去,形成均匀标记的高比活DNA
探针
。其操作
方法
如下:⑴取1?g DNA溶于少量无菌双蒸水中,加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 (0.5mol/L Tris-HCl,PH7.2...
干货|qPCR反应中所使用的的
探针类型
,都在这里!
答:
本文详细介绍了qPCR反应中常用的几
种探针类型
,包括:1. 水解探针 (TaqMan或5'
核酸
酶)这种探针由荧光
标记
的寡核苷酸组成,荧光基团(绿色)与淬灭基团(紫色)通过5'核酸酶的外切酶活性实现分离,产生荧光信号。图4展示了其工作原理。2. 分子信标分子信标探针形成发夹结构,通过目标结合导致荧光基团和淬灭...
基因
探针的探针标记
答:
利用核苷酸碱基顺序互补的原理,用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有
标记
的一段单链DNA(或RNA)分子,与被测定的靶序列互补,以检测被测靶序列的技术叫
核酸探针
技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA
和
寡核苷酸是目前最常采用的探针。
RNA探针
用途很...
基因
探针有哪些种类
,有什么作用?
答:
②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。
当制备基因组DNA探针进
,应先制备...
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