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目的基因的筛选与获取方法
目的基因的获取
答:
所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因。
常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 直接获取
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。利用λ噬菌体载...
如何从基因文库中
筛选
出
目的基因
视频时间 05:23
如何进行
目的基因和
目的的cDNA
的筛选
?
答:
(一)从细胞核中直接分离
简单的原核生物目的基因可从细胞核中直接分离得到,但人类的基因分布在23对染色体上,较难从直接法中得到。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用...
如何从基因文库中
获取目的基因
?
答:
获得目的基因的方法:
一、构建基因文库 提取总DNA
。用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(gene clone)将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(gene library)。二、...
如何从基因文库中
筛选目的基因
答:
大致步骤是:1.从供体中制备高纯度的染色体基因组dna;2.用合适的限制酶把dna切割成若干个片段
;3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来即可。
利用基因工程技术进行药物的研制与开发时,
目的基因的
鉴定
方法
有哪些?其...
答:
将
目的
重组体
筛选
出来就等于
获得
了目的序列的克隆,所以筛选(dcreening)是
基因
克隆的重要步骤。在构建载体,选择宿主细胞、设计分子克隆方案时都必须仔细考虑筛选的问题。以下就常用技术的基本原理加以介绍。一、根据重组载体的标志作筛选 最常见的载体携带的标志是抗药性标志,如抗氨芐青霉素(anpr)、抗...
如何从基因文库中
筛选目的基因
答:
有3种
方法
:核酸杂交法、PCR
筛选
法、免疫筛选法
如何
获取目的基因的
原理及
方法
答:
目的基因
导入受体细胞:原核生物最理想受体细胞:大肠杆菌、枯草杆菌、蓝藻、棒状杆菌。真核生物应用最广的受体细胞:酵母细胞 途径:1电穿孔法2基因枪法3激光微束穿孔法4显微注射法5多聚物介导法6脂质体介导转化法 克隆子的筛选鉴定:克隆子
的筛选方法
:1根据载体选择标记基因2根据报告基因 3根据pcr扩增...
基因
文库 从基因文库中提取基因
答:
有了基因文库,
获取目的基因
可以通过下面三种
方法
.1.可以通过碱基序列人工合成,2.通过特定的限制性内切酶将目的基因剪切下来,3.可以用mRNA通过逆转录合成目的基因.为了
筛选
真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录(见中心法则)合成相应的互补DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多...
载体构建的基本流程
答:
首先,要进行
目的基因的获取
。这是载体构建的第一步,也是最关键的一步。可以通过PCR扩增、基因文库
筛选
、化学合成等
方法获取
目的基因。其中,PCR技术是最常用的方法,可以快速、特异地扩增目的基因。例如,如果我们想获取一个编码特定蛋白质的基因,可以通过设计特定的PCR引物,从基因文库或者cDNA中扩增出该...
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