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荧光原位杂交探针的制备
荧光原位杂交
(FISH)是什么,怎么做?
答:
探针的荧光
素标记可以采用直接和间接标记的方法。间接标记是采用生物素标记DNA探针,
杂交
之后用藕联有荧光素亲和素或者链霉亲和素进行检测,同时还可以利用亲和素-生物素-荧光素复合物,将荧光信号进行放大,从而可以检测500bp的片段。而直接标记法是将荧光素直接与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架共价结合,或在...
原位杂交的探针
包括哪些
答:
各类探针制备如下:①DNA探针。
通过随机引物标记法掺入荧光素标记的dUTP制备DNA探针
。荧光素标记的dUTP也可通过切口平移法和PCR反应掺入DNA探针。②寡聚核苷酸探针。于寡聚核苷酸3′端加上一段由荧光素标记的dUTP短尾便成探针。反应产生的短尾具有较高灵敏度而又不影响杂交的严格性。③RNA探针。通过使用R...
荧光原位杂交
(FISH)实验操作步骤
答:
(c)明胶涂片
制备
:将烘干的玻片放入明胶中10min,然后60℃烘干过夜备用。(d)试剂瓶、塑料器皿及组织匀浆器的处理试剂瓶、组织匀浆器先清洗干净,用1mL/LDEPC(DiethylPyrocarbonate)水溶液浸泡处理(37℃、2h,室温过夜),高压消毒去除DEPC,然后250℃烘干4h以上或200℃过夜。称量试剂勺也要干烤。塑料...
技术| 引物和
探针的制备
方法一览
答:
化学合成的奥秘化学合成是制备引物和探针的常用手段
。从单链的寡核苷酸(19-25个碱基)起,通过磷酰胺合成,每个碱基如同乐高积木般精确构建。关键在于标记,例如FITC、DIG或生物素,它们以11-16个核苷酸间隔巧妙地连接,确保与目标序列的稳定结合,同时不影响后续检测(图1)。碱基艺术与创新设计碱基类似物...
荧光原位杂交的
具体应用
答:
早期的探针较大,
是通过载体的增殖、缺口平移法、体外转录法和随机引物DNA 合成法来制备以获得特异性杂交克隆
。然而大片断的探针通常带有重复序列造成高荧光背景,采用未标记的核酸进行预处理使其与非特异性位点结合用于抑制非特异性杂交可以克服上述问题,同时也使得研究者扩大了检测目标,实现了整条染色体染色。在细胞遗传...
遗传学检测方法:
荧光原位杂交
(FISH)vs 微整列比较基因组杂交(aCGH)
答:
其过程独特而严谨:首先,样本通过精心
制备
,包括固定和预处理,然后进行
杂交
,如同拼图般匹配
探针
与特定序列;显色步骤犹如舞台灯光的聚焦,最后,通过
荧光
显微镜,我们得以窥见基因的细微变化。FISH的优势在于其高分辨率和多色标记,无论是染色体异常的检测、基因定位,还是染色体结构的研究,它都能游刃有余。
基因
探针的制备
答:
当
制备
基因组DNA
探针
进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过
原位杂交
,从中...
基因
探针
是 单链DNA吗基因探针是单链DNA么
答:
或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过
原位杂交
,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,
制备
出大量的
探针
...
核酸诊断的常见技术
答:
选择探针最基本的原则是要有高度特异性,其次也需考虑到
制备探针的
难易性和检测手段的灵敏性等其他因素。1.3 常用核酸分子杂交技术: ① Southern印迹杂交;② Northern印迹杂交;③斑点杂交(dot blotting);④
原位杂交
(in-situ hybridization);⑤夹心杂交(三明治杂交);⑥液相杂交。 恒温扩增技术主要...
基因组
原位杂交
具体是怎么回事
答:
本技术可对组织细胞原位的待测核酸分子进行定性,定量及定位分析。在细胞分化调节、基因定位、肿瘤遗传学、分子病理学、病毒学等领域得到广泛应用。经典的
原位杂交
技术包括载玻片处理,组织细胞的固定,
探针的制备
或选购,原位杂交,洗涤以及检测
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