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wb电泳液和转膜液配方
WB
的内参有曝光而目的基因条带却空白——个人经验荟萃!
答:
答:对于52KD的蛋白,我提高了一倍的浓度,还是一样没有曝光出来。所以对于
WB
白片,这个浓度影响力应该排在比较靠后的位置。10、曝光液的敏感性问题?答:这个是比较关键的因素之一。在第二次跑胶,在蛋白含量不变的情况下,我控制了
转膜
时间,<90分钟,
配制
了新鲜的抗体,同时使用了特超敏的ECL曝光...
使用醋酸纤维素薄膜
电泳
的注意事项
答:
6、透明及保存 透明
液
应临用前
配制
,以免冰乙酸及乙醇挥发影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明前,薄膜应完全干燥。透明时间应掌握好,如在透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解,太短则透明度不佳。透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蜡中,使薄膜软化。如有水,则液体石蜡不易浸入,薄膜不易平展。
westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
答:
(二)
电泳
:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。(三)转移:(半干式转移)1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用
转膜
缓冲
液
平衡,5min×3次。2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜,浸入转膜缓冲液中10min。3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极...
WB
实验结果必须有柱状图吗
答:
第二步:电泳。(1) SDS - PAGE 凝胶
配制
可以使用碧云天生产的 SDS - PAGE 凝胶配制试剂盒。(2)样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的 SDS - PAGE 蛋白上样缓冲
液
。(3)上样
与电泳
。冷却到室温后,把蛋白样品直接上样到 SDS - PAGE 胶加样孔内即可。第三步:
转膜
。用考马斯亮蓝快速...
...24KDa,14KDa)时,
电泳和转膜
(湿转)各需要多长时间较好?
答:
电泳
一般电泳就行。浓缩胶 80v ,蛋白跑出后,电压增大为110v 跑结束即可。湿转条件为100mv 时间为50-80分钟都行。。。关键是采用的配胶浓度10%以上,12% 15%。
westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
答:
原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
电泳
,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其...
...24KDa,14KDa)时,
电泳和转膜
(湿转)各需要多长时间?
答:
这种小分子量的蛋白 半干转就可以了 30KD
电泳
条件: 我们实验室的100V恒压跑。跑到出来就可以裁胶
转膜
了。10%-12%的分离胶 半干转条件:如果裁的是2*8cm 的膜 一般是0.04mA 30-40分钟 转膜:0.45 或者0.22um size 的NC/PVDF膜 24KD 电泳条件: 我们实验室的100V恒压跑。跑到出来就...
转膜
的操作步骤及其注意事项【实验外包】
答:
转膜装备包括6张6cm×9cm的滤纸和1张同样大小的PVDF膜,确保它们尺寸大于胶体,以便电流畅通无阻。切取滤纸和膜时,务必戴上手套,以防手部蛋白污染。接下来,将已浸透的膜和滤纸放置在带有
转膜液
的搪瓷盘中,这一步是
电泳
过程的重要环节。当电泳完成,小心移除玻璃板,去除多余的凝胶,轻轻刮去浓缩胶,...
免疫组化和western blot的区别
答:
1、原理不同:免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶
电泳
分离的...
wb
实验的基本原理及操作流程
答:
二、操作流程
WB
实验的操作流程如下:1. 样品准备与处理:收集样品,并提取蛋白质。可能需要对蛋白质进行定量以确保上样的准确性。2. 蛋白质
电泳
:使用SDS-PAGE凝胶电泳技术,根据蛋白质分子量大小进行分离。3.
转膜
:将蛋白质从凝胶转移到膜上。这一步通常使用半干转膜法或湿转膜法完成。4. 封闭与...
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