假设测定蛋白质的等电点不在缓冲液中进行，当调节pH的时候，每加一滴酸或者碱因为溶液中没有缓冲液，pH的变化会非常剧烈，可能从pH7.0会直接跳到pH11.0。这样就没有办法让pH呈一定梯度的变化。
所以测定蛋白质的等电点应在缓冲液中进行。
一、目的：
了解等电点的意义及其与蛋白质分子聚沉能力的关系。
二、原理：
蛋白质的分子量很大，它能形成稳定均一的溶液，主要是由于蛋白质分子都带有相同符号的电荷，同时蛋白质分子周围有一层溶剂化的水膜，避免蛋白质分子之间聚集而沉降。
蛋白质分子所带的电荷与溶液的
pH值有很大关系，蛋白质是两性电解质，蛋白质在碱性溶液中成
阴离子，在酸性溶液中成阳离子：
蛋白质分子所带净电荷为零时的pH值称为蛋白质的等电点（PI）。在等电点时，蛋白质分子在电场中不向任何一极移动，而且分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加，所以这时可以使蛋白质溶液的粘度、
渗透压均减到最低，且溶液变混浊。若再加入一定量的溶剂如
乙醇、丙酮，它们与蛋白质分子争夺
水分子，竭力减低蛋白质水化层的厚度而使混浊更加明显。
各种蛋白质的等电点都不相同，但偏酸性的较多，如牛乳中的酪蛋白的等电点是4.7~4.8，
血红蛋白等电点为6.7~6.8，
胰岛素是5.3~5.4，鱼精蛋白是一个典型的碱性蛋白，其等电点在pH12.0~12.4。近年来蛋白质的等电点可以采用等电聚焦技术加以准确测定，但需一定的实验条件。本实验采用蛋白质在不同pH溶液中形成的混浊度来确定，即混浊度最大时的pH值即为该种蛋白质的等电点值，这个方法虽然不很准确，但在一般实验条件下都能进行，操作也简便。
四、操作步骤：
1．制备蛋白质胶液
（1）称取酪蛋白3克，放在烧杯中，加入40℃的蒸馏水。
（2）加入50毫升1 mol·L-1
氢氧化钠溶液，微热搅拌直到蛋白质完全溶解为止。将溶解好的蛋白溶液转移到500毫升容量瓶中，并用少量蒸馏水洗净烧杯，一并倒入容量瓶。
（3）在容量瓶中再加入1 mol·L-1
醋酸溶液50毫升，摇匀。
（4）加入蒸馏水定容至500毫升，得到略现浑浊的，在0.1mol·L-1 NaAC溶液中的酪蛋白胶体。
2．等电点测定
按下表顺序在各管中加入蛋白质胶液，并准确地加入蒸馏水和各种浓度的醋酸溶液，加入后立即摇匀。
观察各管产生的混浊并根据混浊度来判断酪蛋白的等电点。观察时可用+，++，+++，表示浑浊度。