第1个回答 2010-07-20
首先理清基因文库的概念 他可不是基因库。“基因文库一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后,将酶切片段插入到载体DNA分子中,所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体,将包含这个生物体的整个基因组,也就是构成了这个生物体的基因文库。”基因文库方法不是建立基因文库就获取了目的基因,而是通过建立了基因文库再利用探针在基因文库的大海中搜寻一定包含的目的基因。在基因文库中,不同的 DNA片段都分别在不同的克隆中扩增了,只要有该基因的探针存在,则从许多克隆中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作。此外基因文库中被克隆的 DNA都是基因组中各种随机的顺序片段,某些 DNA片段还包括基因外部的邻近的甚至互相跨叠的序列,所以基因文库特别有利于研究天然状态下基因的顺序组织。所以它是获取真核目的基因的一种有效手段,常用于生产实践。不知道这样解释楼主能明白么。我以后打算当生物老师呢,呵呵。
补充:基因文库主要目的是分离目的基因,只不过直接从真核细胞中分离很麻烦,但是基因文库方便分离(见上),所以他是需要已知序列的探针,哪怕只是目的基因序列的一部分的探针也可以,只要能识别目的基因就行。
书上的意思应该是目的基因的核苷酸序列未知(包括内含子、TATA框相应基因序列等等完整序列未知),但是探针、mrna是已知的(它们不完整,只能用来识别目的基因,不能替代目的基因,也不能直接用来合成,否则外显子、调控序列与目的基因会有不小的差异)
因为真正的未知序列想要制备分离就很麻烦了:一般情况是将你要做的东西,丢到ncbi里面进行搜索,然后收集序列,最好选择与你做的基因的来源亲缘关系近的物种,选择出来后在ncbi中进行blast进行比对,然后找到保守序列,设计简并引物,可以从基因组中扩增也可以从rna进行扩增,如果扩增的得到的不是全基因序列,可以用walking等方法扩增得到全基因序列。得到序列后你就可以进行转化表达,分析功能了
如果你的东西DNA水平的同源性比较低的话,就要多找很多序列进行分析,然后找到比较保守的block区域。可以用codehop在线网站进行block的寻找和简并引物的设计本回答被提问者采纳
第2个回答 2010-07-15
基因文库简单说就是将细胞中的所有DNA用酶切成小片段,并将每一段利用载体转入宿主细胞中,这样经过培养后,每一个菌株都含有一小段DNA,再利用特殊方法将要检查的目的基因挑选出来菌株,提取DNA后进行测序,
之所以用基因文库是因为,直接测基因组DNA,太大了,测不准,而利用载体进入宿主细胞之后,DNA片段可以随宿主细胞一起复制,可以得到很多相同的拷贝,方便检查
第3个回答 2010-07-15
"建立基因文库怎么就能知道目的基因的碱基序列了"这样的理解是错误的。基因文库,就相当于一个图书馆;目的基因,相当于一本你要找的书。但这个图书馆的管理不怎么样,所以想要马上找到目的基因是相当困难的。必须用基因探针等方法,经过复杂细微的过程,才可以得到目的基因。
第4个回答 2018-07-29
基因文库包括基因组文库和部分基因文库。将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
一个基因文库中应包含的克隆数目与该生物的基因组的大小和被克隆DNA片段的长度有关。原核生物的基因组较小,需要的克隆数也较少;真核生物的基因组较大,克隆数需相应增加,才能包含所有的基因。此外,每一载体DNA中所允许插入的外源DNA片段的长度较大,则所需总克隆数越少;反之则所需数越多。如果一个基因文库的总克隆数较少,则从中筛选基因虽然比较容易,但给以后的分析造成困难,因为片段的长度增加了。如果要使每一克隆中的DNA片段缩短,就须增加克隆数,所以在建立基因文库前应根据研究目的来确定 DNA片段的长度和克隆的数目。L.克拉克和J.卡邦在1975年提出一个统计学的公式来计算某一基因文库中所应包含的克隆数目。在建立基因文库时,任何一个DNA片段都是在随机的基础上被克隆的。在公式中,P 是从建成的基因文库中可能选出某一基因的概率,这一数字由工作者根据需要选定。基因文库中每一克隆所含外源DNA片段的平均长度,可根据该生物基因组大小和所用载体可容纳的外源 DNA片段的长度决定。G是该生物基因组的大小,基因组大小和DNA片段长度的单位可用道尔顿或碱基对表示。N 是这一基因文库所应包含的克隆数目。本回答被网友采纳