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rt-pcr产物做测序结果有双峰,这个结果就完全不能用了吗?
如题所述
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推荐答案 2013-10-10
如果是测序结果开始没有问题,后面出现问题,有可能是测序本身的问题,再试试看。如果所有位置都有双峰,那问题比较倾向于实验本身的问题,还要看你实验目的是什么:如果RT-PCR结果是用来分析基因的表达,那么两种不同片段都被计算在表达量上了,因此就彻底没有什么用了,重新开始吧。如果你是想克隆一个基因或者一个基因片段,那么没有关系,把RT-
PCR扩增
的片断纯化后装到任何一个载体里面,转化大肠杆菌,获得阳性克隆。按照概率,其中一部分应该是你需要的目的基因,酶切后进行测序鉴定,找出你需要的克隆就可以了。
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