采用高效液相色谱法（附录Ⅴ D</）对己烯雌酚含量进行测定。色谱条件如下：色谱柱使用十八烷基硅烷键合硅胶填充；流动相为甲醇-水的75:25混合物；检测波长设定为254nm。
实验步骤如下：取己烯雌酚对照品约10mg，加入50ml氯仿使其溶解，于暗处放置至少5小时。随后，吸取5.0ml溶液，挥干氯仿，残留固体（顺式体和反式体）用乙醇-水（1:1）25ml溶解。将10μl溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，观察已烯雌酚反式体峰和顺式体峰，其相对保留时间分别为1:1.33。理论板数应至少达到1000，峰间分离度应大于3.0。
测定过程中，首先精确称取一定量的己烯雌酚对照品，配制成每1ml含有0.1mg的乙醇-水溶液。接着，精密吸取10μl溶液，同样注入液相色谱仪并记录色谱图。对于样品，同样按照上述方法进行处理。测定结果采用外标法定量，以己烯雌酚反式体峰面积和顺式体峰面积的总和（顺式体峰面积乘以1.26）来计算己烯雌酚的含量。
己烯雌酚是人工合成的非甾体雌激素物质，能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用。主要用于雌激素低下症及激素平衡失调引起的功能性出血、闭经，还可用于死胎引产前，以提高子宫肌层对催产素的敏感性。