加多了细胞裂解液是否有补救措施?

Question

如题所述

Answer 1

博凌科为解答：在您进行细胞裂解液的使用过程中，若感觉操作不够规范，可以考虑以下几个方面进行改进：
1. 细胞收集方法：对于贴壁生长的细胞，您可以选择用刮刀将细胞从培养皿上刮下来，或者使用消化酶将细胞消化后收集。
2. PMSF的配制：通常将PMSF配制成100 mmol/L的储备液（可以用乙醇或异丙醇作为溶剂），在使用时按1:100的比例稀释到裂解液中，以达到1 mmol/L的最终浓度。
3. 蛋白电泳时的定量：在进行蛋白质电泳分析时，除非您的实验目的是检测蛋白质的表达量或者观察条带的显现，一般情况下需要对蛋白进行定量。可以使用BCA蛋白定量试剂盒或者考马斯亮蓝G-250进行定量。后者虽然准确性稍逊，但成本较低。细胞裂解液的添加量通常需要根据实验经验来调整，一个参考依据是观察细胞裂解后释放的体积大小。
4. 蛋白定量配方：上样缓冲液的配方可以在网上查到，多种选择可供参考。
5. 考马斯亮蓝G-250的灵敏度：在使用考马斯亮蓝G-250进行蛋白质定量时，请注意其灵敏度有限，通常适用于蛋白质量大于10 mg的样本。具体信息可以在相关文献中查到。同时，还需要注意考马斯亮蓝G-250染色步骤和配方的选择，可以参考一些专业论坛上的经验分享。