在蓝藻细胞中高效表达外源目的基因的策略
1、构建在蓝藻细胞中稳定性好的表达载体系统:现已构建了松驰质粒复制起始点的穿梭质粒,在细胞中有较高的基因拷贝数,提高了目的基因高效表达的可能性。
2、重组穿梭质粒在蓝藻细胞中通常是很不稳定的,在缺选择压力的培养条件下很容易丢失,导致目的基因表达的不稳定性。近年来以蓝藻染色体DNA的非必需序列区为基因整合平台,构建相应的供体质粒表达载体,通过同源重组将目的基因整合到蓝藻染色体上保证其稳定。
3、组装含强启动子的外源表达盒。
4、外源基因融合表达:近年来开发了泛素融合表达系统。经蓝藻、大肠杆菌及酵母细胞的实验证明,目的基因泛素基因融合表达可大大提高目的基因的表达量,并且几乎所有泛素融合形式产生的蛋白质都是具有活性的,同时,泛素还可被作为分离标签。
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