blot 电泳转移液中甲醇和SDS各有什么作用

Question

如题所述

Answer 1

SDS是阴离子活性剂，聚丙烯凝胶电泳中加入SDS可以使蛋白质变性，肽链伸展，SDS与蛋白质结合，使其都带有负电。每克蛋白质大约可结合1.4gSDS。这些电荷量远远大于蛋白质分子原来所带的电荷，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，分子量越大携带电荷越多。又因为是在聚丙烯凝胶中电泳，由于分子筛效应，肽链越长，迁移速率越慢。在一定分子量范围内（15KD~200KD）蛋白质分子量的对数与蛋白质多肽链的迁移率之间有线性关系。因此可以根据迁移率求出对应的分子量大小。
网上说甲醇可以激活PVDF使其带阳离子以便于和带阴离子的SDS蛋白质结合物相结合，但是PVDF的化学式中找不到可以携带阳离子的地方。而且不明白为什么亲润甲醇就可以使其携带阳离子。。后来我的老师告诉我网上说的不对。。甲醇在激活PVDF膜和transfer buffer中的用途是不一样的。PVDF由于疏水性并不能和蛋白质结合，而甲醇可以赋予其亲水性。而在transfer buffer中，甲醇是用来remove SDS的。因为在电场中，尤其是小分子蛋白，与SDS结合很容易穿过膜而不能和膜结合。因此需要甲醇来remove SDS。使蛋白和膜更好的结合。

Answer 2

我们实验室的配方如下：
5X电泳缓冲液：15.1g Tris+94.0g Gly+5.0g SDS 配成1L
转移缓冲液：3.03g Tris+14.42g Gly+200mL CH3OH 配成1L
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