如何用crisp/cas9制作转基因小鼠

Question

如题所述

Answer 1

用crisp/cas9制作转基因小鼠需要在胚胎上进行。

诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。

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Answer 2

您好，具体制备的流程如下：针对待转入外源基因的位点进行sgRNA的设计，同时做靶位点的测序；进行sgRNA-Cas9质粒的构建；sgRNA活性检测；sgRNA-Cas9质粒体外转录成mRNA;带有外源基因的打靶载体构建；小鼠受精卵的分离；mRNA注射入小鼠受精卵；受精卵移植代孕母鼠的输卵管；小鼠出生后进行基因型鉴定。
利用CRISPR/Cas9技术制备的转基因小鼠是定点插入，不同于传统的随机转基因。