什么是等电点聚焦电泳？论述其优点和缺点？

Question

如题所述

Answer 1

蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的ph环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的ph环境中解离成带正由荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的ph环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个有ph梯度的环境中，对各种不同等电点的蛋白质混合样品进行电泳，则在电场作用下，不管这些蛋白质分子的原始分布如何，各种蛋白质分子将按照它们各自的等电点大小在ph梯度中相对应的位置处进行聚焦，经过一定时间的电泳以后，不同等电点的蛋白质分子便分别聚焦于不同的位置
。

Answer 2

等电聚焦电泳是利用特殊的一种缓冲液（两性电解质）在凝胶（常用聚丙烯酰胺凝胶）内制造一个pH梯度，电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点（pI）的pH处（此时此蛋白质不再带有净的正或负电荷），形成一个很窄的区带。
电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄;由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离;可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH单位。电聚焦技术的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀，二
是样品中的成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。