与胶体电泳有关的因素有:
1、电场强度。
电场强度是指单位长度的电位降,也被称电势梯度。
电场强度对电泳速度起着正比作用,电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据实验的需要,电泳可分为两种:一种是高压电泳,所用电压在500~1000V或更高。
由于电压高,电泳时间短(有的样品需数分钟),适用于低分子化合物的分离,如氨基酸,无机离子,包括部分聚焦电泳分离及序列电泳的分离等。
2、溶液的pH。
它决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。
因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中溶液的pH值恒定,必须采用缓冲溶液。
3、溶液的离子强度。
溶液的离子强度(Ion intensity)是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。
低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02~0.2之间。
4、电渗。
在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗。在电场中液体对于一个固体的固定相相对移动称为电渗。在有载体的电泳中,影响电泳移动的一个重要因素是电渗。最常遇到的情况是γ-球蛋白,由原点向负极移动,这就是电渗作用所引起的倒移现象。
产生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团,如滤纸中含有羟基而带负电荷,与滤纸相接触的水溶液带正电荷,液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在,所以带电粒子的移动距离也受电渗影响。
扩展资料:
目前所采用的电泳方法,大致可分为3类:显微电泳,自由界面电泳和区带电泳。区带电泳应用广泛,区带电泳可分为以下几种类型:
1、按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:
(1)滤纸为支持物的纸电泳。
(2)粉末电泳:如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳。
(3)凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳。
(4)缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳。
2、按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:
(1)平板式电泳:支持物水平放置,是最常用的电泳方式。
(2)垂直板电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。
(3)柱状(管状)电泳:聚丙烯酰胺凝胶可灌入适当的电泳管中做成管状电泳。
3、按pH的连续性不同,区带电泳可分为:
(1)连续pH电泳:如纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳。
(2)非连续pH电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。
参考资料来源:百度百科——电泳
胶体电泳速度的快慢与下列因素有关:
一、电压
胶体电泳速度与电压有关,电压E越高,电泳速率v越快;电压E越低,电泳速率v越慢。(Helmholz方程)。
二、胶体浓度
胶体电泳速度与胶体浓度有关,胶体浓度越大,胶体的介电常数ε和粘度η也越大,前者有利于电泳速率增大而后者不利于电泳速率增大,反之亦然。
三、环境温度高
胶体电泳速度与环境温度有关,环境温度越高电流热效应越大(电压越高,通电时间越长),电泳速率较慢。环境温度越低电流热效应越小,电泳速率较快。
四、电极间距
胶体电泳速度与电极间距有关,这可从电泳的速率公式看出。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。
五、胶体是否纯化过
如果辅助液(这里是稀盐酸)的电导率于溶胶的电导率相差较大,则在整个电泳管内的电位降是不均匀的,这时就不能用H=U/L求电位梯度平均值。
扩展资料:
电泳实验的应用:
一、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用。
二、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量。其原理是带大量电荷的SDS结合到蛋白质分子上克服了蛋白质分子原有电荷的影响而得到恒定的荷/质比。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质分子量已经比较成功,此法测定时间短,分辨率高,所需样品量极少(1~100μg),但只适用于球形或基本上呈球形的蛋白质,某些蛋白质不易与SDS结合如木瓜蛋白酶,核糖核酸酶等,此时测定结果就不准确。
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。电泳后的凝胶经凝胶扫描仪扫描,从而给出定量的结果.凝胶扫描仪主要用于对样品单向电泳后的区带和双向电泳后的斑点进行扫描。
四、琼脂或琼脂糖凝胶免疫电泳可用于检查蛋白质制剂的纯度;分析蛋白质混合物的组分;研究抗血清制剂中是否具有抗某种已知抗原的抗体;检验两种抗原是否相同。
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