[HPLC测定乳制品中三聚氰胺含量]奶粉中三聚氰胺含量测定

如题所述

在亚洲,由于地域广阔,为了更方便地进行认识,通常按照地理方位将亚洲划分为东亚、南亚、东南亚、中亚、西亚和北亚六个地区。这些地区拥有各自独特的自然环境和人类活动特色。东亚位于亚洲东部,包括中国、日本、韩国、朝鲜和蒙古国,总面积约1170万平方千米,人口超过17亿。该地区地势西高东低,大致可分为四个阶梯。
西亚是指亚洲的西部,涵盖土耳其、以色列、伊朗、伊拉克、叙利亚、黎巴嫩、巴勒斯坦、约旦、科威特、沙特阿拉伯、也门、阿曼、阿拉伯联合酋长国、卡塔尔、巴林、格鲁吉亚、阿富汗、亚美尼亚和阿塞拜疆等国家。
东南亚是亚洲的东南部地区,包括新加坡、马来西亚、印度尼西亚、泰国、越南、老挝、菲律宾、柬埔寨、缅甸、文莱和东帝汶等国家。
中亚是指中亚细亚地区,包括土库曼斯坦、乌兹别克斯坦、吉尔吉斯斯坦、塔吉克斯坦和哈萨克斯坦。
南亚是指亚洲的南部地区,包括印度、马尔代夫、不丹、斯里兰卡、巴基斯坦、孟加拉国和尼泊尔。
北亚是指俄罗斯亚洲部分的西伯利亚地区。
三聚氰胺(melamine)是一种重要的氮杂环有机化工原料,通常用于塑料制品中合成树脂的生产,部分亚洲国家也用来制造化肥。三聚氰胺含氮量为66.6%,是蛋白质平均含量的4.16倍,牛奶的151倍,奶粉的23倍。每100g牛奶中添加0.1克三聚氰胺,就能提高0.4%含氮量,因此三聚氰胺也被称为"蛋白精"。食品工业通常采用的蛋白质测试方法是凯氏定氮法,该方法只能测定氮的总量,不能识别氮的来源和氮源的种类。由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的这一缺陷,不法商人得以制造伪劣食品,导致了奶粉"三聚氰胺"事件,其涉及面广、性质恶劣、危害巨大。
检测三聚氰胺的方法主要包括高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、ELISA试剂盒法、毛细管电泳法、近红外线吸收检测法等,其中高效液相色谱(HPLC)法是最普遍且相对简便的方法。通过优化沉淀剂沉淀、微波超声、离心分离等前处理步骤,建立了一种应用高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的方法,该方法的检测效果良好。
在实验中,准确称取100毫克(精确到0.1毫克)三聚氰胺标准品于100毫升容量瓶中,用甲醇水溶液(甲醇:水=1:1)溶解并定容至刻度,配制成浓度为1.0毫克/毫升的标准储备液,于4℃避光保存。用流动相将三聚氰胺储备液逐级稀释到浓度为0.8、2、20、40、80微克/毫升的标准工作液,经0.2微米滤膜(有机)过滤后,由浓度低到高分别取50微升注入色谱仪进行检测,测定峰面积,以峰面积对浓度(微克/升)作标准曲线。
称取5克(精确至0.01克)固体样品或20克(精确至0.01克)液体样品于50.0毫升比色管中,加入2毫升乙酸铅溶液(22克/升)用三氯乙酸溶液(10克/升)定容至50毫升刻度。进行微波超声提取20分钟,移入离心管中,以10000转/分钟离心5分钟,吸取上清液,用0.2微米的微孔滤膜(有机)过滤,滤液待上机使用。取50微升注入色谱仪中,测定峰面积,根据保留时间定性,外标峰面积定量。
试样中三聚氰胺的含量按式(1)进行计算:
X = \frac{A \times C \times V}{m \times f}
式中:
X --试样中三聚氰胺含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
A --试样溶液中三聚氰胺的峰面积;
A, --标准溶液中三聚氰胺的峰面积;
C --标准溶液中三聚氰胺的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V --试样最终定容体积,单位为毫升(mL) ;
m --试样的质量,单位为克(g);
f --稀释倍数。
结果表明,四种样品不同浓度加标三聚氰胺的回收率为98.0%~102.6%,说明该方法的加标回收率范围良好。在实验中,还选取了一加入三聚氰胺的奶粉进行检测,图1是奶粉中检测出三聚氰胺的谱图,对该样品做加标回收其检测的加标回收率为102.3%,完全符合最佳的加标回收率范围(90%~110%)。同时对该样品在前处理的过程中用固相萃取柱进行洗涤、洗脱、净化后检测,并且和高一级的实验室中气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行了比对,其检测结果和以上检测结果一样。这充分说明检测的效果良好,能够全面的应用到实验室检验检测中。
本文建立了一种简便、快速、高效利用液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺,很好地排除了蛋白质、脂肪以及其它含氮物质等因素的影响,简化了检验检测的复杂过程,使其检测技术容易掌握,检测结果准确。在日常的检验检测工作中具有很强的实用性和高效性。
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