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原位杂交探针制备原理
探针
设计教程-如何设计
原位杂交
的探针
答:
2.
原位杂交
相比免疫组化,定位相对准确,但如果蛋白在间质中发挥作用,原位杂交就检测不出来了,结合图像分析,原位杂交也可以对目的基因的转录半定量。 3.首先是标本对照,这个包括阳性对照和阴性对照;第二个是
探针
对照,主要是明确探针的特异性;第三个是探针正义连阴性对照,第四个未标记探针竞争抑制;第五个不含探针的...
原位杂交
的
探针
包括哪些
答:
各类探针制备如下:①DNA探针。
通过随机引物标记法掺入荧光素标记的dUTP制备DNA探针
。荧光素标记的dUTP也可通过切口平移法和PCR反应掺入DNA探针。②寡聚核苷酸探针。于寡聚核苷酸3′端加上一段由荧光素标记的dUTP短尾便成探针。反应产生的短尾具有较高灵敏度而又不影响杂交的严格性。③RNA探针。通过使用R...
荧光
原位杂交
(FISH)实验操作步骤
答:
其基本原理是,
按照两个核酸的碱基序列互补原则,用特殊修饰的核苷酸分子标记DNA探针
,然后将标记的探针直接原位杂交到染色体或DNA纤维切片上,再与荧光素分子偶联的单克隆抗体和探针分子特异性结合,经荧光检测系统和图形分析技术对染色体或DNA纤维上的DNA序列定位、定性和相对定量。试验方法如下:1)玻片处理...
荧光
原位杂交
技术的简介
答:
FISH技术是一种非放射性分子遗传学实验技术,
其基本原理是将直接与荧光素结合的寡聚核苷酸探针或采用间接法用生物素、地高辛等标记的寡聚核苷酸探针与变性后的染色体、细胞或组织中的核酸按照碱基互补配对原则进行杂交
,经变性—退火—复性—洗涤后即可形成靶DNA 与核酸探针的杂交体,直接检测或通过免疫荧光系...
原位杂交
的
原理
是什么?有何用途?
答:
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交
,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性...
nssd是什么意思?
答:
nssd的意思是荧光
原位杂交
技术。利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交,通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异
探针杂交
后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光
原位杂交
的具体应用
答:
1.
原理
FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性
原位杂交
技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸
探针
是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛,可利用该报告分子与...
荧光
原位杂交
与免疫荧光有什么区别
答:
原位杂交
是从分子水平检测,免疫荧光是从蛋白水平检测。免疫荧光是利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘制方法,使用荧光素标记
探针
,以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。荧光原位杂交的
原理
:FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一...
原位杂交
的
原理
是什么?有何用途
答:
原位杂交
的
原理
是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即
探针
)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体...
基因
探针
的
制备
答:
当
制备
基因组DNA
探针
进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过
原位杂交
,从中...
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