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原位杂交探针可以使用多少次
荧光
原位杂交
技术的特点
答:
探针稳定,
一次标记后可在两年内使用
;3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确;4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列,其灵敏度与放射性探针相当;5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列;6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,...
FISH检测主要是检测什么
答:
FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性
原位杂交
技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸
探针
是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
荧光
原位杂交探针
和荧光探针有什么区别
答:
①操作操作简便,探针标记后稳定,
一次标记后可使用二年
;②方法敏感,能迅速得到结果;③在同一标本上,可同时检测几种不同探针;④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究等特点。
荧光
原位杂交
(FISH)是什么,怎么做?
答:
5.
杂交
信号的放大(适用于
使用
生物素标记的
探针
)(1)在玻片的杂交部位加150 μL封闭液I,用保鲜膜覆盖,37℃温育20min。(2)去掉保鲜膜,再加150 μLavidin-FITC于标本上,用保鲜膜覆盖,37℃继续温育40 min。(3)取出标本,将其放入已预热42~50℃的洗脱液中洗涤3次,每次5 min。(4)...
荧光
原位杂交
技术的原理
答:
或染色体片段)或多种基因状态的信息。
用
已知的荧光素标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合,形成可被检测的
杂交
双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而
可以探针
直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。
组织
原位杂交
用于原位杂交的
探针
答:
常用的
探针
类型包括单链和双链DNA,以及RNA。探针的理想长度通常在100到400核苷酸之间,然而,研究表明,更短的寡核苷酸探针(16-30 nt)因其能自由穿透细菌和组织细胞壁,从而提高了杂交效率。因此,寡核苷酸探针和通过不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针,成为了组织
原位杂交
的理想选择。标...
什么是荧光
原位杂交
?有什么用?
答:
原位杂交
(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH),是一种固相分子杂交的方法,它是用标记的DNA或RNA为
探针
,在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3H、35S、...
基因
探针
是什么?
答:
寡核苷酸
探针
是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也
可以
按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。3.探针的标记 为了确定探针是否与相应的基因组DNA
杂交
,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性...
荧光
原位杂交
技术的应用
答:
选择按一定顺序排列的基因
探针
,
可以
帮助确定染色体倒位,尤其是臂间倒位的性质,如急性白血病有16号染色体的倒位,选择两个分别位于断裂点近端和远端的粘粒探针,同时用16号染色体着丝位探针,正常细胞荧光信号的次序是:粘粒-粘粒-着丝粒,而白血病细胞的信号的次改变为粘粒-着丝粒-粘粒。
杂交
细胞通常是含有单个人类染色体...
分子
杂交
的杂交技术应用
答:
若所
用
的核酸
探针
的片段较长(几百个核苷酸以上),
可以
得到很准确的鉴定结果。但若人工合成的寡核苷酸探针片段较短(如20~30个核苷酸),则难免会出现准确性差的假阳性现象。现又有非放射性核素标记核酸探针,如以碱性磷酸酶标记的酶标核酸探针,以及以生物素标记的核酸探针等,这必将有助于推动分子
杂交
在临床医学中的...
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