组织原位杂交用于原位杂交的探针

Question

如题所述

Answer 1

原位杂交中的探针选择是关键步骤。常用的探针类型包括单链和双链DNA，以及RNA。探针的理想长度通常在100到400核苷酸之间，然而，研究表明，更短的寡核苷酸探针（16-30 nt）因其能自由穿透细菌和组织细胞壁，从而提高了杂交效率。因此，寡核苷酸探针和通过不对称PCR标记的小DNA探针或体外转录标记的RNA探针，成为了组织原位杂交的理想选择。

标记探针的方法也有多种，常见的包括放射性同位素，如3H和35S。3H探针因其半衰期长，成像分辨率高，便于定位，但其能量较低；而35S标记探针活性较高，影像分辨率也较好。然而，32P标记探针能量过高，可能导致影像模糊，不利于精确定位。因此，在选择标记物时，需要考虑探针的活性和成像效果。

标本的固定条件对原位杂交效率有显著影响。探针能否有效进入细胞，很大程度上取决于组织中蛋白质的处理。通常采用0.2mol/L HCl处理载玻片，随后用蛋白酶K进行消化，再通过不同浓度的乙醇脱水来去除蛋白质。虽然原位杂交技术已取得显著进步，但在敏感性、特异性以及稳定性方面仍有待进一步提升和优化。