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原位杂交探针合成
探针
设计教程-如何设计
原位杂交
的探针
答:
如何设计
原位杂交
的
探针
1.探针分为好多种,你要先决定你用何种,是RNA探针还是DNA探针,杂交时,RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好,所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点;DNA探针背景稍微深一些,不过也可以,标记方法比前者简单一些,另外还有寡核苷酸探针,此类探针分子量小,通透性好,但就是标记的敏感性不高。 2.原...
原位杂交
的
探针
包括哪些
答:
各类
探针
制备如下:①DNA探针。通过随机引物标记法掺入荧光素标记的dUTP制备DNA探针。荧光素标记的dUTP也可通过切口平移法和PCR反应掺入DNA探针。②寡聚核苷酸探针。于寡聚核苷酸3′端加上一段由荧光素标记的dUTP短尾便成探针。反应产生的短尾具有较高灵敏度而又不影响
杂交
的严格性。③RNA探针。通过使用R...
如何制作
原位杂交
的
探针
答:
你要检测的片段你一定知道吧?让试剂公司给你
合成
就行啦!要是当做一个问题回答的话就更简单啦!把你要检测的片段用DnaseⅠ进行部分酶切,然后在用带有标记的dNTP进行DNA合成补齐缺口,这样带有标记的探针就合成了。
原位杂交
组织化学技术的二、核酸
探针
的应用
答:
2.按核酸不同性质,
探针
又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和
合成
寡核苷酸探针。cDNA探针又可分为双链cDNA探针和单链cDNA探针。 根据不同的
杂交
实验要求,应选择不同的核酸探针。在大多数情况下,可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下,必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。
原位杂交
的原理是什么?有何用途?
答:
原位杂交
是指将特定标记的已知顺序核酸为
探针
与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,通过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性...
简述
原位杂交
的步骤。
答:
原位杂交
是应用核酸
探针
与组织或细胞中的核酸按碱基配对原则进行特异性结合形成杂交体,然后应用组织化学或免疫化学方法在显微镜下进行细胞内定位或基因表达的检测技术。操作步骤如下:(1)载片的清洁与处理载片的清洁很重要,特别不能有核酸酶的污染。为了在后续的杂交和冲洗等步骤中防止组织或细胞从载片上...
荧光
原位杂交
(FISH)是什么,怎么做?
答:
一、实验方法原理:FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为
探针
,按照碱基互补的原则,与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合,形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列,因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记
原位杂交
...
探针
设计在线-如何实现
原位杂交
之探针设计
答:
程序仅需要输入一些简单的信息,比如,目标蛋白的氨基酸序列及
合成
核酸序列的温度。程序输出的为适合所选择生物表达的优化密码子的核酸序列。利用DNAWorks的帮助,用两步PCR法,可以成功合成长度达到3000碱基对的基因。原始网站。 ThePrimerGenerator在线引物设计程序。 Primer3比较有名的在线引物设计程序。 PrimoPro3.4在线PCR...
荧光
原位杂交
技术的简介
答:
1969年,Gall和Pardue等首次将同位素
探针
用于
原位杂交
实验,获得成功。1987年,染色体原位抑制杂交法的创建,使FISH技术得以迅速发展。随后,Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素等非放射性物质标记探针,创立了双色FISH技术。1990年,Nederlof等用3种荧光素成功探测出了3种以上的靶位DNA序列,从而宣告了多...
原位杂交
的荧光原位杂交
答:
荧光
原位杂交
(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,
探针
首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料[1,2]...
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