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如何制作原位杂交的探针
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第1个回答 2010-12-31
你要检测的片段你一定知道吧？让试剂公司给你合成就行啦！要是当做一个问题回答的话就更简单啦！把你要检测的片段用DnaseⅠ进行部分酶切，然后在用带有标记的dNTP进行DNA合成补齐缺口，这样带有标记的探针就合成了。
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原位杂交的探针
包括哪些
答：
各类探针制备如下：①DNA探针。
通过随机引物标记法掺入荧光素标记的dUTP制备DNA探针
。荧光素标记的dUTP也可通过切口平移法和PCR反应掺入DNA探针。②寡聚核苷酸探针。于寡聚核苷酸3′端加上一段由荧光素标记的dUTP短尾便成探针。反应产生的短尾具有较高灵敏度而又不影响杂交的严格性。③RNA探针。通过使用R...
荧光
原位杂交
(FISH)是什么,
怎么
做?
答：
将已变性或预退火的DNA探针10 μL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37℃
杂交
过夜（约15～17 h）。由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。4. 洗脱 此步骤有助于除去非特异性结合
的探针
...
技术| 引物和
探针
的制备方法一览
答：
效率与精度的平衡引物和探针的长度与性能息息相关。理想情况下，15-20个核苷酸的寡核苷酸能在保持高效
杂交的
同时，兼顾一致性。过长
的探针
可能降低纯度，因此在
原位杂交
中，通常选择多个短片段而非一个大片段（图4）。探索与应用的广阔领域寡核苷酸探针因其长寿命、高纯度和成本效益，广泛应用于实时PCR和...
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