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原位杂交探针合成
基因
探针
的制备
答:
当制备基因组DNA
探针
进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过
原位杂交
,从中...
{
原位杂交
}
探针
长度是多少?
答:
原位杂交探针
长度是100-400nt。用于原位杂交的探针可以是单链或双链DNA,也可以是RNA探针。通常探针操作的长度以100-400nt为宜,过长则杂交率减低。最近研究结果表明,寡核苷酸探针(16-30nt)能自由出入细菌和组织细胞壁,杂交效率明显高于长探针,因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或体外...
荧光
原位杂交
与免疫荧光有什么区别
答:
荧光
原位杂交
与免疫荧光的区别:原位杂交是从分子水平检测,免疫荧光是从蛋白水平检测。免疫荧光是利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘制方法,使用荧光素标记
探针
,以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。荧光原位杂交的原理:FISH(fluorescence ...
请教关于microRNA
原位杂交
答:
RNA原位核酸杂交 RNA原位核酸杂交(RNA nucleic acid hybridization in situ)又称RNA
原位杂交
组织化学(RNA in situ hybridization histochemistry)或RNA原位杂交(RNA in situ hybridization RISH)。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等
探针
检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构...
荧光
原位杂交
的荧光原位杂交技术的发展历程
答:
早期的
探针
较大,是通过载体的增殖、缺口平移法、体外转录法和随机引物DNA
合成
法来制备以获得特异性
杂交
克隆。然而大片断的探针通常带有重复序列造成高荧光背景,采用未标记的核酸进行预处理使其与非特异性位点结合用于抑制非特异性杂交可以克服上述问题,同时也使得研究者扩大了检测目标,实现了整条染色体染色...
荧光
原位杂交
的具体应用
答:
相对于GFP 活细胞
原位杂交
检测,FISH 易受到细胞内
合成探针
的影响。FISH 需要进一步的改进以降低活体基因表达检测时的干扰背景,避免细胞内自身杂交物的干扰。其实完全可以不必考虑FISH 检测和荧光检测蛋白技术的差异,将FISH 技术和荧光蛋白技术结合起来可以同时检测目的核酸和蛋白。 多光子显微技术的应用进一步扩大了荧光图像...
荧光
原位杂交
技术的介绍
答:
荧光
原位杂交
技术(Fluorescence in situ hybridization, FISH)是根据已知微生物不同分类级别上种群特异的DNA序列,以利用荧光标记的特异寡聚核苷酸片段作为
探针
,与环境基因组中DNA分子杂交,检测该特异微生物种群的存在与丰度。
核酸
探针
的核酸
杂交
答:
杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术较为常用,先将待测核酸结合到一定的固相支持物上,再与液相中的标记
探针
进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜)或尼龙膜(nylon membrane)。固相杂交包括膜上印迹杂交和
原位杂交
。前者包括三个基本过程:第一,通过...
原位杂交
技术在基因研究中的广泛应用有哪些?
答:
原位杂交
技术在生物学研究中发挥着关键作用,它通过细胞特异性mRNA转录定位,为我们揭示基因图谱、基因表达和基因组进化提供了有力工具(基因表达水平的分析)。在感染研究中,原位杂交技术更是不可或缺,它能够精准地检测和定位组织中的病毒DNA或RNA,例如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA,对于...
原位杂交
的意义
答:
原位杂交
:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DNA或RNA片段作为核酸
探针
,与...
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