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有菌但是测序测不出来
菌落pcr
检测
有条带,
但是测序
结果根本没有连上,是什么原因
答:
菌落pcr的假阳性很多,也有很多原因,所以一般都是需要测序结果佐证的。1,
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性
,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。2,靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原...
求助
菌
液PCR跑了好几次都是阳性,
测序却
没有信号
答:
可能你的菌液不是单克隆,还有可能你的目的片段有重复序列,形成发夹结构
。 本回答被提问者采纳 1 已赞过 已踩过< 你对这个回答的评价是? 评论 分享 新浪微博 QQ空间 举报 收起 1条折叠回答 其他类似问题2013-03-28 为什么菌液PCR 引物一个载体上的 一个是PCR片段上的 鉴... 2016-07-24 菌液PCR的...
菌
液PCR的时候能P出目的条带,为什么
测序却
完全不正确?
答:
菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大
,我们实验室一般对于高拷贝数的质粒,循环数不会超过25个,一般用25个。假阳性出现的原因关键在于做连接的时候加了比较多的目的基因的酶切产物,在转化时,那些没有连接入载体的PCR产物,有的会沾在感受态细胞上,还有的虽然在溶液中,涂板时一起就...
菌
液PCR的时候能P出目的条带,为什么
测序却
完全不正确?
答:
因 不同的酶反应条件不一样,
细菌已经通过摇床摇起,送
测序
为什么说提取质粒失败,要从新摇
菌
呢
答:
因为你用的是表达用的菌株,这里的质粒的拷贝数都不高,所以你可以把质粒自己提取
出来
,洗脱的时候少加点洗脱液,拿质粒去
测序
。还可以把这个质粒转到DH5a中,送去测序。
...
菌
液pcr后电泳有目的条带,为什么送菌液
测序
结果是空载体呢 ?_百度...
答:
2、如果是克隆,连接T载体后不用酶切,直接转化菌落pcr
检测
有目的条带的话送样
测序
即可。 3、如果是做表达载体构建,pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳,如果两个酶切位点很近,几乎看
不到
被切下来的小片段条带(太小,早就跑
出去
了)。你要是怕酶切不完全就多稍微加点酶,...
菌
液PCR的时候能P出目的条带,为什么
测序却
完全不正确
答:
有可能是引物特异性不好或者细菌细胞杂质所带来的假阳性~得到的条带有可能是混合的~建议
测序
分析模板用提取的核酸做模板……若还是不对 请重新设计引物 或采用巢式PCR
DNA
测序
为什么会失败
答:
如果
菌
生长的不好,提
出来
的模版
测序
效果也不好。 如果DNA模板的质量没问题,有一段区域总是
测不
通,那就要考虑模板本身存在“难通过”的结构了。基因组中一些高度重复序列,GC 富集序列,Poly A/T 序列 通常都是测序的“难点”,相对于质粒模板,PCR 产物的测序效果要差很多。 二是引物的原因,...
...送
菌
液去公司
测序
说是信号弱
测不出来
是怎么回事啊??
答:
浓度不够或者条带不单一,
测序不
是说能看到条带就能测的,如果没有明显的主测序峰也算信号弱。
菌落PCR产物
检测
大小对的,可送去
测序
结果就不对,不是我要的东西,这是...
答:
最理想的引物理论上只有一种PCR产物,
但是
这样完美的引物是不存在的,因此一对引物存在多种扩增产物之正常现象,只要控制好体系条件,应该能够得到你需要的产物。楼主PCR产物
检测
大小是对的,但Marker只是分子量标准,对于相同大小或相差不大的非特异性扩增产物无法区分,因此楼主可以选择改换更加特意的引物...
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