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核酸探针的种类及常用的标记方法
分子杂交技术的
核酸探针标记法
答:
核酸探针根据核酸的性质,
可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针
;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA探针,它广...
探针有哪些类型
?
探针标记有哪些方法
答:
探针标记方法有:随机引物标记、切口平移法、末端标记法
。切口平移是切口产生3'羟基和5'磷酸基团,DNA延伸合成3'端,5'端被小片段降解,缺口位点沿着双链向3'端移动,是在体外向DNA分子引入放射性标记核苷酸的技术。随机引物合成是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。末端标记...
原位杂交组织化学技术的二、
核酸探针的
应用
答:
非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种
。2.按核酸不同性质,探针又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。
cDNA探针又可分为双链cDNA探针和单链cDNA探针
。 根据不同的杂交实验要求,应选择不同的核酸探针。在大多数情况下,可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在...
核酸的标记
物
有哪些
答:
核酸标记物有以下几类
1.核素标记物 放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物
。放射性核素的灵敏度极高,可以检测到10-14~10-18克的物质,在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量。常用标记核酸探针的核素有32P、3H、35S,在Southern印迹杂交中以“P最常用。还应根据标记方法的不同选...
核酸探针的种类
答:
可将核酸探针分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类
。作为诊断试剂,较常使用的是基因组DNA探针和cDNA探针。其中,前者应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的DNA后将其克隆到质粒或噬菌体载体中,随着质粒的复制或噬菌体的增殖而获得...
有几
种核酸标记的方法
答:
通过
核酸标记
技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几
种方法
:1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA
探针
,检测经Northern blot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。3.细胞因子mRNA经反转录为...
什么是荧光原位杂交?
有什么
用?
答:
常用的同位素标记物有3H、35S、125I和32P,
非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种
。探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和合成寡核苷酸探针。探针的荧光素标记可以采用直接和间接标记的方法。间接标记是采用生物素标记的dUTP(biotin-dUTP) 经过缺口平移法进行...
核酸
诊断的
常见
技术
答:
1.2 基因探针及其标记: 基因探针是一段与待测DNA或RNA互补的核苷酸序列,可以是DNA或RNA,长度不一,可为完整基因,也可为其中一部分。根据探针的来源和性质分为
基因组DNA探针
、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针。作为探针至少必须满足两个条件,一是应为单链(或通过变性形成单链),二是应...
核酸探针的标记
答:
切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将
标记
的dNTP掺入到新形成的DNA链中去,形成均匀标记的高比活DNA
探针
。其操作
方法
如下:⑴取1?g DNA溶于少量无菌双蒸水中,加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 (0.5mol/L Tris-HCl,PH7.2...
基因
探针的探针标记
答:
寡核苷酸探针一般为十数个至数十个碱基,渗透性强,但信号放大作用则较差,合成的多相寡核苷酸探针,敏感性可以达到cDNA探针水平。
探针的标记方式
有放射性标记和非放射性标记。标记物质有放射性元素(如32P等)和非放射性物质(如生物素、地高辛等)。32P是最
常用的
核苷酸标记同位素,被标记的dNTP本身就...
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常用的核酸探针非放射性标记物有
与核酸探针的标记无关的是