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核酸探针标记的方法
分子杂交技术的
核酸探针标记
法
答:
(9)用电泳方法分离放射性标记的探针
。2. 从RNA合成单链cDNA探针 cDNA单链探针主要用来分离cDNA文库中相应的基因。用RNA为模板合成cDNA探针所用的引物有两种: (1)用寡聚dT为引物合成cDNA探针。本方法只能用于带Poly(A)的mRNA,并且产生的探针极大多数偏向于mRNA 3'末端序列。(2) 可用随机引物合成cDNA探针。该法...
核酸探针的标记
答:
常将放射性同位素如32 P连接到某种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)上做为标记物,然后通过切口平移法标记探针
。切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去,形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下:⑴...
分子杂交技术
核酸探针标记
法
答:
切口平移法通过E.coli
DNA聚合酶将放射性核苷酸掺入DNA链,产物比活性受多种因素影响,如核苷酸掺入程度和酶的质量。所需材料有DNA模板、未标记dNTP、特定酶等。操作步骤包括配比混合、水浴反应、终止反应及沉淀回收探针。
随机引物合成法
利用Klenow酶合成DNA探针,其产物长度和比活性取决于反应条件,如模板...
有几种
核酸标记的方法
答:
1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northern blot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法
。2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应(PCR)扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细...
探针有哪些类型?
探针标记
有哪些
方法
答:
探针标记方法有:随机引物标记、切口平移法、末端标记法
。切口平移是切口产生3'羟基和5'磷酸基团,DNA延伸合成3'端,5'端被小片段降解,缺口位点沿着双链向3'端移动,是在体外向DNA分子引入放射性标记核苷酸的技术。随机引物合成是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。末端标记...
核酸探针的
印迹技术
答:
用
探针
与经Southern印迹处理的DNA样品杂交,可鉴定待测DNA的大小、进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片段长度多态性分析(RFLP)等。Southern印迹的操作
方法
有三种: 这是近年来发展起来的一种简单、快速、高效的DNA和
RNA
印迹法。其基本原理是利用真空作用将转膜...
核酸
检测用什么做
探针
答:
核酸探针
是指带有
标记
物的已知序列的核酸片段,它能和与其互补的核酸序列杂交,形成双链,所以可用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。每一种病原体都具有独特的核酸片段。核酸探针法原理是碱基配对,利用核酸探针测定跟踪。互补的两条核酸单链通过退火形成双链,这一过程称为核酸杂交。化学及生物学意义...
DNA或
RNA
分子
探针
要用什么
标记
答:
DNA
探针的标记方法
较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。DNA探针技术又称分子杂交技术,是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等
标记的
特定DNA片断,该片断...
寡核苷酸
探针的
非放射性
标记
答:
寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端一段互补的寡核苷核序列,此序列的5’-端多加一个A,与目的基因片段退火,再用Klenow酶延伸,使bio –dUTP掺入探针的3’末端。2.5’磷酸
末端标记法
带5’-磷酸的寡核苷酸探针,在咪唑缓冲液中用水溶性碳二...
基因
探针的探针标记
答:
但为废弃物的处理减轻了压力。非放射性标记法有酶标法和化学物标记法。酶标
方法
与免疫测定ELISA方法相似,只是被
标记的核酸
代替了被标记的抗体,事实上被标记的抗体也称为
探针
,现有许多商品是生物素、地高辛标记的。血凝素与生物素有非常高的亲和性,当血凝素标记上过氧化物酶或碱性磷酸酶,...
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核酸探针的种类及常用的标记方法
与核酸探针的标记无关的是
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核酸探针标记物的种类
常用的核酸探针非放射性标记物有
探针标记的方法
探针的标记方法有哪些
核酸探针标记物有哪些及其特点