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电泳与模板链方向判断
聚合酶链式反应常见问题
答:
PCR反应中,产物的
电泳
检测一般建议在48小时内进行,最理想的是当天检测,以防带型不规则或消失。假阴性问题可能出现在多个环节,如
模板
含有杂质、Taq酶抑制剂、未消化的蛋白质或提取过程中出现问题。保证酶和引物质量的同时,应检查样本处理和提取过程是否到位,比如调整消化处理液和固定操作程序。引物质量...
DNA测序仪
答:
12.
模板
抑制试剂(TSR) ABI产品。13.10×
电泳
缓冲液 ABI产品。14.ABI PRISM 310型全自动DNA测序仪。15.2400型或9600型PCR仪。16.台式冷冻高速离心机。17.台式高速离心机或袖珍离心机。【操作步骤】1.PCR测序反应 (1) 取0.2ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂:所加...
聚合酶链反应的原理
答:
以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿
模板
以5’→3’
方向
延伸,合成DNA新
链
(因其反应过程有高温,所以反应所用的聚合酶必须为热稳定DNA聚合酶)。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能...
谁知道PCR?生物、基因一类的啦
答:
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双
链
或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物
与模板
DNA单链的互补序列...
聚合酶链反应的原理
答:
以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿
模板
以5’→3’
方向
延伸,合成DNA新
链
(因其反应过程有高温,所以反应所用的聚合酶必须为热稳定DNA聚合酶)。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能...
什么是PCR检测?他的原理是什么?需要什么材料?
答:
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双
链
或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物
与模板
DNA单链的互补序列...
聚合酶链反应简介
答:
将PCR反应体系升温至95℃左右,双
链
的DNA
模板
就解开成两条单链,此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下,3'端与5'端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合,此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时,耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的...
ToneScript cDNA 第一链合成试剂盒常见问题
答:
ToneScript cDNA第一
链
合成试剂盒是专门用于两步法RT-PCR的第一步,含有合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,适用于后续的PCR、qPCR以及基因克隆。那么在实际操作中会有哪些常见问题呢?一起来了解一下:1、 没有RT-PCR产物或产量低 ◆RNA
模板
降解。RNA的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的...
基因分型为什么要去除具有亲缘关系的样本
答:
引物与互补DNA结合后,以靶DNA单
链
为
模板
,经反链杂交复性(退火),在TaqDNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料按5'到3'
方向
将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。然后又开始第二次循环扩增。引物在反应中不仅起引导作用,而且起着特异性的限制扩增DNA片段范围大小的作用。新合成的DNA...
为什么只有使用受体生物自身基因的启动子才比较有利于基因的表达_百 ...
答:
反转录酶既可以利用DNA又可以利用RNA作为
模板
合成与之互补的DNA链.像其他DNA聚合酶一样,反转录酶也以5′→3′
方向
合成DNA(图1-3). cDNA合成过程是:第一步,反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链,形成RNA-DNA杂交分子.第二步,核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解,使之变成单链的DNA.第三步,...
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