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电泳与模板链方向判断
聚合酶链式反应简介
答:
将PCR反应体系升温至95℃左右,双
链
的DNA
模板
就解开成两条单链,此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下,3'端与5'端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合,此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时,耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的...
基因克隆
答:
接下来,我们以PVT1的全长序列为
模板
设计克隆引物(SnapGene设计的引物序列与T/A克隆中一样),不过我们还要在引物的5’端添加选择好的限制性内切酶的酶切位点以及相应的保护碱基(图24)。同样使用Taq DNA 聚合酶或者其他高保真DNA聚合酶,以细胞的cDNA为模板进行PCR,产物经琼脂糖凝胶
电泳
或割胶回收目的大小片段。 回收的...
求Thermo的RevertAid First strand cDNA Synthesis kit试剂盒的中文说 ...
答:
这种情况下,只有带3’-poly(A)尾的mRNA是cDNA合成的
模板
。• 序列特异性引物:在引物结合位置。用这个系统合成的第一链cDNA可用做PCR*模板。因为cDNA合成和PCR的反应条件是一致的,所以cDNA反应混合物可直接加入PCR混合物。 合成的第一链cDNA也可用做第二链合成的模板。放射标记的DNA 可用做杂交探针。 带3’-...
DNA测序的测序技术
答:
高退火温度可减少模板二级结构。提高引物结合模板配对的严谨性。
链
重退火
和模板
二级结构则限制了小片断PCR产物(<500bp)得到清楚的序列数据的能力。引物延伸起始于每个循环的退火阶段。在较低温度时,聚合酶可能会遇到坚固的二级结构区域,它可导致聚合酶解离。则在四个
电泳
道中均有同一相对位置的条带。因为这些原因,...
急求!!DNA测序的问题
答:
这样长短不同的片段的末端DNA必定是那一组的双脱氧DNA,这么多片段在变形
电泳
上以跑就分出来了。引物就是合成双链DNA用的RNA,没有引物DNA自己是没法复制的。
模板
量是不是就是开始加入的目的DNA的量,因为双脱氧法是要求DDNTP随机渗入随机终止的,那开始的模板量就要大,但是应该不是任意大的,测序本身就测不了太长...
什么是rep-PCR
答:
Rep-PCR:Versalovic于1996年描述的一种细菌基因组指纹分析方法,即细菌基因组重复序列PCR技术(rep-PCR)是扩增细菌基因组中广泛分布的短重复序列,通过
电泳
条带比较分析,揭示基因组间的差异。细菌基因组中广泛分布的短重复序列(repetitive sequence),包括常用的REP(repetitive Extragenic Palindromic,基因...
双脱氧
链
终止法的双脱氧测序的试剂
及
具体操作步骤
答:
(2) 配制方法① 取1.5ml处于对数生产期的培养菌液(含有待测病毒核酸的重组质粒
模板
),离心除去上清液后,用150ml Tris/葡萄糖缓冲液 重悬菌团,在室温下放置5分钟。② 加入300ml的1%SDS,0.2mol/L NaOH,颠倒混合约15次,在室温下放置15分钟,加入225ml 3mol/L醋酸钠(pH4.5),颠倒约15...
rna
电泳
需要引物吗为什么
答:
rna
电泳
不需要引物,因为DNA的合成需要一段引物,而RNA聚合酶可以直接以
模板链
为参考来合成子链,不需要引物。一般需要做溶解曲线来检测引物的 特异性;同时最好将 PCR 产物进行电泳检测产物是否单一
基因测序的步骤是什么?
答:
各种标准的质粒制备方法所纯化出的质粒均可作为测序模板使用。用标准方法制备的M13噬菌体、粘粒、λDNA都适合用作测序模板用。但要注意的是反应体系中不应有与引物互补的非目的基因序列,否则将会导致测序实验的失败。2、 测序引物:测序引物是指合成的与测序
模板链
特异性互补的寡核苷酸序列。可用α-32P-...
我不懂PCR的意义?生物化学方面的词
答:
在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟.使引物延伸完全,并使单
链
产物退火成双链。 PCR-PCR常见问题5.7
电泳
检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①
模板
核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件...
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